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yufei6915

木虫 (著名写手)

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9楼: Originally posted by jinpeng_6118 at 2012-01-08 22:27:34
利用分光光度计法pNPB测脂肪酶活性,酶比活计算公式如下:
Beer定律的数学表达式为A=kbc,
摩尔吸光系数:公式A=kbc中的以为1mol/L,b为1cm时,则系数k称为摩尔吸光系数,以ε表示,单位为升/(摩尔•厘米), ...

您好! 我是做这方面实验的研究生,现在准备些毕业论文,也遇到了这样的问题。根据您的回答,我理解了这几个公式,现在有个问题是这样的,我做的反应体系是100微升,是用酶标仪测的OD405nm。因为根据您最后的公式:U/mg=10(6次方)x△A V /tεM=10(6次方)x K V/εM,测得的脂肪酶活力只与A,V,t,和ε有关,与我底物的C物质的量浓度没有关系了。  我的问题是,我的底物浓度是0.5mmol/L不是1mol/L,反应用的不是比色皿,b不是1cm,那我如何用摩尔消光系数 计算酶活力呢?谢谢!
goodluckformyself~~
11楼2014-06-25 08:28:38
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jinpeng_6118

木虫 (正式写手)

引用回帖:
10楼: Originally posted by yufei6915 at 2014-06-24 21:41:45
您好! 我是做这方面实验的研究生,现在准备些毕业论文,也遇到了这样的问题。根据您的回答,我理解了这几个公式,现在有个问题是这样的,我做的反应体系是100微升,是用酶标仪测的OD405nm。因为根据您最后的公式: ...

我们当时测酶活反应做的是动力学实时曲线扫描的,直接测定出曲线斜率,再带入那个公式的。你用酶标仪是不是直接测定的两个点,那你就按酶活的定义,单位时间内水解到少底物所加的酶量,来计算这个酶活,这样计算比那个简单。
人生百态原为海,看破红尘方为岸!
12楼2014-06-30 20:48:25
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yufei6915

木虫 (著名写手)

引用回帖:
12楼: Originally posted by jinpeng_6118 at 2014-06-30 20:48:25
我们当时测酶活反应做的是动力学实时曲线扫描的,直接测定出曲线斜率,再带入那个公式的。你用酶标仪是不是直接测定的两个点,那你就按酶活的定义,单位时间内水解到少底物所加的酶量,来计算这个酶活,这样计算比 ...

恩,我现在就买标准品呢,准备按照这个定义来做呢,谢谢!!
goodluckformyself~~
13楼2014-07-01 08:15:35
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13262668293

新虫 (初入文坛)

能不能分享一下你测脂肪酶活力的具体实验方法,包括所用试剂,缓冲液的配制,我测得脂肪酶活力结果不是很好,谢谢!
14楼2017-05-17 15:49:45
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屁事真多

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
5楼: Originally posted by muchong5577 at 2011-08-23 08:49:16
脂肪酶是在油水界面催化反应,机理不同于其它单一相的酶类,其反应不符合传统的酶促动力学方程(有文献报道过),根据初速度计算酶活不科学。建议楼主采用pNPB加标准曲线法。

请问你还记得是那篇文章吗?
15楼2018-12-24 21:39:34
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