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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 请教脂肪酶活性测定
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yufei6915

木虫 (著名写手)

飞
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9楼: Originally posted by jinpeng_6118 at 2012-01-08 22:27:34
利用分光光度计法pNPB测脂肪酶活性，酶比活计算公式如下：
Beer定律的数学表达式为A=kbc，
摩尔吸光系数：公式A=kbc中的以为1mol/L,b为1cm时，则系数k称为摩尔吸光系数，以ε表示，单位为升/（摩尔•厘米）， ...

您好！ 我是做这方面实验的研究生，现在准备些毕业论文，也遇到了这样的问题。根据您的回答，我理解了这几个公式，现在有个问题是这样的，我做的反应体系是100微升，是用酶标仪测的OD405nm。因为根据您最后的公式：U/mg=10（6次方）x△A V /tεM=10（6次方）x K V/εM，测得的脂肪酶活力只与A，V，t，和ε有关，与我底物的C物质的量浓度没有关系了。  我的问题是，我的底物浓度是0.5mmol/L不是1mol/L，反应用的不是比色皿，b不是1cm，那我如何用摩尔消光系数 计算酶活力呢？谢谢！
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goodluckformyself~~
11楼2014-06-25 08:28:38
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jinpeng_6118

木虫 (正式写手)
引用回帖:
10楼: Originally posted by yufei6915 at 2014-06-24 21:41:45
您好！ 我是做这方面实验的研究生，现在准备些毕业论文，也遇到了这样的问题。根据您的回答，我理解了这几个公式，现在有个问题是这样的，我做的反应体系是100微升，是用酶标仪测的OD405nm。因为根据您最后的公式： ...

我们当时测酶活反应做的是动力学实时曲线扫描的，直接测定出曲线斜率，再带入那个公式的。你用酶标仪是不是直接测定的两个点，那你就按酶活的定义，单位时间内水解到少底物所加的酶量，来计算这个酶活，这样计算比那个简单。
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人生百态原为海，看破红尘方为岸！
12楼2014-06-30 20:48:25
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yufei6915

木虫 (著名写手)

飞
引用回帖:
12楼: Originally posted by jinpeng_6118 at 2014-06-30 20:48:25
我们当时测酶活反应做的是动力学实时曲线扫描的，直接测定出曲线斜率，再带入那个公式的。你用酶标仪是不是直接测定的两个点，那你就按酶活的定义，单位时间内水解到少底物所加的酶量，来计算这个酶活，这样计算比 ...

恩，我现在就买标准品呢，准备按照这个定义来做呢，谢谢！！
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goodluckformyself~~
13楼2014-07-01 08:15:35
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13262668293

新虫 (初入文坛)
能不能分享一下你测脂肪酶活力的具体实验方法，包括所用试剂，缓冲液的配制，我测得脂肪酶活力结果不是很好，谢谢！
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14楼2017-05-17 15:49:45
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屁事真多

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by muchong5577 at 2011-08-23 08:49:16
脂肪酶是在油水界面催化反应，机理不同于其它单一相的酶类，其反应不符合传统的酶促动力学方程（有文献报道过），根据初速度计算酶活不科学。建议楼主采用pNPB加标准曲线法。

请问你还记得是那篇文章吗？
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15楼2018-12-24 21:39:34
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