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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 通用引物扩增细菌16S rDNA
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Biohydrogen

金虫 (正式写手)
退火时间短点试试,20s就够了
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11楼2011-08-22 09:24:14
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zxjdawn

银虫 (小有名气)
引用回帖:
10楼: Originally posted by hzl5888 at 2011-08-21 22:13:23:
如果菌株没有问题的话，建议在组分浓度上找找原因，因为我这里看不到你的引物浓度，会不会是引物浓度太高，如果引物的浓度很高产生引物二聚体的概率就比较高。也有可能是菌株不纯，还有可能是体系中出现了污染。 ...

谢谢你哦，应该是模板不纯，后来我把菌挑到ddH2O里面沸水浴十分钟，然后离心取上清做模板，就只有一条带了哦~~祝福大家实验都顺顺利利哦~~~
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走自己的路，看身边的风景~~
12楼2011-08-22 21:57:34
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zhen_fang
引用回帖:
1楼: Originally posted by zxjdawn at 2011-08-19 16:12:07:
我用通用引物扩增细菌16S rDNA，直接菌落PCR，我试了7、8次，每次都有700bp左右的的非特异性扩增，目的片段也有，在1500bp左右，我老师说他以前一做就出来了，根本没有非特异性扩增，为什么我每次都有呢，请各位虫 ...

13楼2011-08-22 22:12:03
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584686214

新虫 (初入文坛)
个人认为退火时间可以短一点   循环中的延伸时间也可以短一点 都30s
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14楼2012-06-07 16:25:02
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