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hwandy87

银虫 (小有名气)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 299.4
帖子: 179
在线: 26.9小时
虫号: 1080456

[交流] 求用超声波破碎大肠杆菌以求得重组蛋白的具体步骤...

求用超声波破碎大肠杆菌以求得重组蛋白的具体步骤...
搜集的菌液用多大的转速，离心多久可将菌与菌液分开？细胞破碎时的PBS缓冲液浓度和PH是多少？破碎完后，应以多大的转速，温度和离心时间来离心分离？

问题有点啰嗦，但确实是不懂...谢谢！

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1楼 2011-08-09 09:30:24

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

斌斌1990

金虫 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
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在线: 112.1小时
虫号: 1213605

★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
hwandy87(金币+5): 很详细，非常有帮助...谢谢！ 2011-08-11 20:11:20

挑取单菌落培养12h，以1：50的比例扩大到LB培养基中，37℃摇床培养2h后用20%IPTG进行诱导，定时取出样品，收集细菌（4℃ 10000rpm/min离心5min），用1×PBS重悬沉淀，在相同的条件下离心5min，用1mL1×PBS重悬沉淀，并转移到1.5mL离心管中，-20℃冻融三次后用超声波在冰上破碎1min，12000rpm/min离心25～30min，将上清转入1.5mL离心管中，4℃保存备用，需要进行电泳时取上清，按1:1的比例与上样缓冲液混合均匀，100℃沸水浴，处理5min。即可作为样品进行SDS-PAGE电泳。

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