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疯狂修行者

木虫 (正式写手)

MolEPI: 7
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性别: GG
专业: 农业昆虫学

[求助] 荧光定量怎么成了这样

我跑了荧光定量怎么撇腿呢？哪位大侠帮解决一下，谢谢。

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戒骄戒躁，坦荡做人，平常心做事，享受生活之美！！

1楼2011-08-03 10:47:32

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lzpbar

至尊木虫 (著名写手)

应助: 3 (幼儿园)
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虫号: 351021
注册: 2007-04-21
性别: GG
专业: 白血病

【答案】应助回帖

疯狂修行者(金币+1): 关键是我用的是mix，只能变变退火温度了！ 2011-08-12 14:18:13

首先这个是染料法的熔解曲线图，通过熔点来判断特异性，即是否存在引物二聚体或非特异扩增等。如果是基因表达相对定量，要确定目标基因和参考基因的扩增效率一致性，可从以下方面确定和优化扩增效率：1）确定扩增效率。可通过阳性标准品比如质粒的梯度稀释和标准曲线来确定，或者通过免费软件DART-PCR、LinRegPCR等来计算。2）扩增效率优化。多设计几对引物进行筛选是最重要的，效果远好于后续的优化。如果说引物筛选是粗调，那么优化只是细调，优化的主要对象包括[Mg2+]浓度、退火温度、PCR buffer类型、酶用量等。