单酶切连接......急 - 分子生物 - 综合其他 - 第2页小木虫论坛-学术科研互动平台

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hnksc

铁虫 (初入文坛)

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目的片段是从质粒上切下来的，载体去磷酸化后按照说明书的方法提纯了。现在仍是没菌生长。

11楼2011-08-03 16:47:48

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w2boluo

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★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖

CIAP处理时间不能过长，最好控制在30分钟以下。紫外测低浓度核酸不准，你这等于没测浓度，还是跑胶靠谱。尤其EcoRI这种星号活性严重的酶，更应该回收了以后电泳定量。

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How about the future？

12楼2011-08-03 17:09:52

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hnksc

铁虫 (初入文坛)

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CIAP处理时间长了会怎么样？

13楼2011-08-03 17:51:41

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wind20020108

铁虫 (小有名气)

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★
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比例加到1：8 然后酶加到3微升 16度连接过夜

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不知道能说啥

14楼2011-08-25 16:02:25

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hnksc

铁虫 (初入文坛)

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还没有成功，试试你的方法。

15楼2011-09-02 09:32:16

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yanshuai511

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西瓜(金币+2): Good！貌似是酶液里面有甘油，酶的体积大了，甘油的量会影响反应。 2011-09-04 18:47:43

我们一般是目的片段比质粒在1：3到1：10之间的，具体的到没有什么确切的比例。会不会是你酶的体积超过了你反应体积的10%，这样就不行。

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16楼2011-09-04 11:07:42

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