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wanghuiling新虫 (正式写手)
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新 C18的使用
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| 新C18柱子该注意什么呢？流动相是2%乙腈，用磷酸缓冲液调制pH2的混合液。第一次使用这根C18柱，寻求洗脱方法，谢谢~ |
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【答案】应助回帖
wanghuiling(金币+8, 博学EPI+1): 谢谢，是不是一定要按这个比例冲洗柱子呢？后期的55%甲醇冲半小时可不可以不做。直接用纯甲醇冲了？ 2011-08-03 11:30:39
wanghuiling(金币+2): 2011-08-12 09:07:51
wanghuiling(金币+2): 2011-08-12 09:07:51
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1、新柱的处理：我们每次新买的柱子虽然是经厂家测试过并密封好 的，可是有的柱子到达手中时已经过很长的时间了，因此，我们每拿 到一根新的色谱柱都必须要对柱子进行处理。首先，是配制好 65% 的乙腈/水，再把色谱柱正确的连接在色谱仪上，出口放空（注意： 出口端切不可连上检测器，以免污染了检测器） 以低流速 ， 0.1ml/min~0.5ml/min（如果是 LC/MC 柱子，则应以 0.3 ml/min 进行） 均可，不可以高流速进行，等看见柱子出口有液体流出后，过 20 分 钟后再接上检测器，以循序渐进的方法将流速调至 1.0ml/min（如果 是 LC/MC 柱子则应以 0.3 ml/min 进行），继续冲洗 2~8 小时。 2、新柱的使用：首先我们确认所分析样品流动相的 PH 是不是在色 谱柱 PH 的耐受范围之内，以免损伤柱子!如果，确认在柱子的使用范 围之内，就用做样品的流动相平衡柱子(如果流动相中含用缓冲盐溶 液，在平衡柱子之前务必要先用 5%甲醇或 5%乙腈去过渡 30 分钟以 上。再用带盐的流动相去平衡色谱柱。)当色谱柱平衡了足够时间， 基线非常平稳的时候，方可进样分析。 3、色谱柱清洗：①如果样品分析中只用到一般的乙腈、甲醇和水的 流动相，在做完样品之后可直接用 55%~65%乙腈/水或者用 55%~65% 甲醇/水冲洗色谱柱 40~80 分钟，然后以纯甲醇或乙腈冲洗 30 分钟， 即可保存；②如果样品分中流动相里含用缓冲液或酸或离子对试剂的 流动相，在做完样品之后的清洗必须按照如下步骤进行清洗柱子:先 用 5%的甲醇/水或 5%的乙腈/水，以 1ml/min,冲洗 1.5 小时以上(如果 色谱柱更长， 则还需要增加适当时间);然后用 55%甲醇/~水 65%/水冲 洗色谱柱 30~60 分钟.最后用甲醇或乙腈以 1ml蒸馏水/min 冲洗 30 分钟。 备注：甲醇、乙腈要用色谱纯。水用是重 |
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