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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 毕赤酵母表达过程中线性化DNA去磷酸化的问题
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oxliujun

铁虫 (小有名气)

[求助] 毕赤酵母表达过程中线性化DNA去磷酸化的问题

请教高手们一个问题：
在毕赤酵母表达过程中，重组目的基因的pPICZα载体酶切线性化后，有的文献提到要去磷酸化处理，有的没提到，我想问问是否一定要做去磷酸化处理，不做对转化效率影响大吗？
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1楼 2011-07-26 15:59:21
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空谷幽风

金虫 (正式写手)
★ ★
amisking(金币+2): 鼓励应助 2011-07-26 20:28:22
去磷酸化通过防止载体自连来间接提高重组效率，一般单酶切的质粒最好都做一下去磷酸化，双酶切只要不是用同尾酶就没必要做去磷酸化处理了，对转化没有任何影响
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a?,c??ae~?a,EURc§?c?μé-,cs,,a‘?é?“i1/4?i1/4?i1/4?i1/4?
4楼2011-07-26 20:12:53
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
oxliujun(金币+1): 2011-07-26 16:18:25
dhd997(金币+2): good 2011-07-26 20:50:25
不是的，我们酶切之后直接kit回收后就转的，也能转化出来。去磷酸化处理的目的是防止重新自连。
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2楼2011-07-26 16:14:21
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oxliujun

铁虫 (小有名气)
谢谢！
我是用SacⅠ单酶切重组载体进行线性化，那磷酸化应该可以提高电转化效率，就是不知道如果不进行磷酸化处理转化效率会下降多少？
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5楼2011-07-27 10:49:05
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yanlinchun

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by oxliujun at 2011-07-27 10:49:05
谢谢！
我是用SacⅠ单酶切重组载体进行线性化，那磷酸化应该可以提高电转化效率，就是不知道如果不进行磷酸化处理转化效率会下降多少？

不需要去磷酸化，转化又不是单酶切位点酶连。
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6楼2013-07-13 16:56:48
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