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笑了乐(金币+30, 博学EPI+1): 只是复制过来，没有回答我的问题，还是加分吧 2011-09-14 09:44:38
【摘要】 目的研究黄根醇提物对四氯化碳所致大鼠肝纤维化的保护作用。方法大鼠首次于背部皮下注射纯CCl4 5 ml/kg，以后每周2次注射40%(V/V) CCl4花生油3 ml/kg，连续注射8周。8周后取血，计算大鼠的肝脾指数，检测大鼠血清中ALT，AST的活性及其总蛋白（TP）、白蛋白(Alb)的含量，计算白蛋白与球蛋白的比值；检测血清中透明质酸(HA)、层黏连蛋白(LN)、Ⅲ型前胶原(PCⅢ)、Ⅳ型胶原(CⅣ) 的含量；检测肝脏组织中超氧化物歧化酶(SOD)活性、羟脯氨酸（Hyp）含量、丙二醛（MDA）和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)水平。结果黄根醇提物能明显降低CCl4所致的大鼠肝纤维化肝脾指数的升高(P<0.01)和血清中ALT，AST活性的升高(P<0.01)，降低血清中HA，LN ，PCⅢ，CIV，GLB的含量(P<0.01)，升高血清中的TP，ALB含量和A/G的比值(P<0.01)；降低肝组织中MDA 的水平和Hyp 的含量(P<0.01)，亦能升高肝组织中SOD的活性和GSH-Px的水平(P<0.01)。结论黄根醇提物具有显著的抗肝纤维化的作用。
肝纤维化是慢性肝病重要的病理特征，也是进一步向肝硬化发展的主要中间环节［1］。目前研究认为肝纤维化是一个动态过程，尚属于可逆性病变，其转归与肝损伤因素是否持续存在有关，如果得到及时彻底治疗，肝损伤停止发展，则肝纤维化多可逆转；病情如不断发展则可能导致肝硬化甚至肝癌［2］。因此，肝纤维化的防治在临床上具有十分重要的意义。黄根Prismatomeris tetrandra，为壮医用药，具有软坚散结、利湿退黄等功效［3］，广西民间多用其治疗慢性肝炎［4］。本研究采用四氯化碳(CCl4)所致慢性大鼠肝纤维化模型，探讨黄根醇提物对肝纤维化的影响。本文实验尚属首次。
1 器材
1.1 药品谷丙转氨酶（ALT）和谷草转氨酶（AST）试剂盒（批号 20060620），超氧化物歧化酶（SOD）测试盒（批号 20060610），丙二醛（MDA）测试盒（批号 20060615），谷胱甘肽过氧化物酶（GSH）测试盒和考马斯亮兰蛋白测定试剂盒（批号 20060620），以上试剂盒均为南京建成生物工程研究所产品。秋水仙碱，为昆明制药药品销售有限公司产品，批号 20060418。四氯化碳(CCl4，分析纯)，为重庆川江化学试剂厂产品，批号 20050426，实验时用花生油配成0.08%四氯化碳溶液。黄根，由广西药材站购进，经广西中医学院药用植物教研室韦松基副教授鉴定为茜草科植物三角瓣花Prismatomeris tetrandra（Rox -b.） K. Schum. 的根。
1.2 动物清洁级Wistar大鼠，雌雄各半，体重160～200 g。由广西医科大学实验动物中心提供，合格证号：SCXK桂2003～0003。
1.3 黄根醇提物的制备
将黄根粉碎成粗粉，用乙醇加热回流提取两次，合并提取液，滤过，浓缩至无醇味，加水稀释致所需浓度，于4℃冰箱保存备用。
1.4 仪器
Biofuge strutos型高速低温离心机（Kendro Laboratory products）。JY92-2D型超声波细胞粉碎机（宁波新芝科器研究所）。YKH-I型液体快速混合器（江西医疗器械厂）。Agilent8453紫外分光光度计。ZFQ-85A型旋转蒸发仪（上海安亭电子仪器厂）。
2 方法［5］
2.1 造模采用CCl4造成大鼠肝纤维化模型，除正常组外，其余各组每只大鼠首次于背部皮下注射纯CCI4 5 ml/kg，以后皮下注射40%(V/V) CCl4花生油3 ml/kg，每周注射2次，共8周。
2.2 分组与给药将大鼠随机分为6组，每组各16只，即正常组，模型组，阳性组，黄根醇提物高、中、低剂量组。造模与给药同时进行。各组每天灌胃（ig）给药，给药容量为20 ml·(kg-1·d-1)，连续8周。正常组和模型组给予蒸馏水，阳性组给予秋水仙碱0.2 mg/kg，高、中、低剂量组分别灌胃黄根醇提物12，6，3 g 生药/kg。股动脉取血，常规分离血清，大鼠处死前禁食不禁水24 h。
2.3 检测指标检测血清中的谷丙转氨酶(ALT)、血清谷草转氨酶(AST)的活性及其总蛋白（TP）、白蛋白(ALB)的含量，计算白蛋白与球蛋白的比值（A/G）；并检测血清中的肝纤维化四项指标，即检测Ⅲ型前胶原(ProcollagenⅢ,PCⅢ)、IV型胶原（Collagen Type IV，CIV）、透明质酸(Hyaluronicacid,HA)和层粘连蛋白(Laminin,LN)的含量。取肝脏、脾脏称量，计算肝指数、脾指数；并用肉眼观察大鼠肝脏的外形、体积、颜色、质地的改变，一部分肝脏用生理盐水制成10%的肝匀浆，用于检测肝组织中超氧化物歧化酶（SOD）的活性、羟脯氨酸（Hyp）的含量、丙二醛（MDA）和谷胱甘肽过氧化物酶（GSH）的水平。
2.4 数据处理各组实验数据均以±s表示，采用统计软件SPSS13.0进行组间t检验，P<0.05有统计学意义。
3 结果
3.1 黄根醇提物对大鼠肝脏、脾脏系数的影响见表1。与正常组比较，模型组大鼠肝脾重量明显增加，肝脾指数明显升高（P<0.05）。与模型组比较，黄根醇提物各剂量组大鼠肝脾指数显著降低（P<0.01），并能明显降低肝脾的重量（P<0.01）。结果提示，黄根醇提物能明显对抗CCl4导致的肝纤维化大鼠肝脾指数的升高。表1 黄根醇提物对CCl4致肝纤维化大鼠的肝脾重量及肝脾指数的影响
3.2 黄根醇提物对大鼠血清中ALT，AST的影响见表2。常规分离血清，按照说明书的要求测试ALT（谷丙转氨酶），AST（谷草转氨酶）的活性。与正常组比较，模型组大鼠血清中ALT，AST活性显著升高（P<0.01），提示造模成功。与模型组比较，黄根醇提物各剂量组大鼠血清中ALT，AST的活性显著降低（P<0.01）。与高剂量组比较，中剂量组大鼠血清中ALT的活性有显著性差异（P<0.05）。结果提示，黄根醇提物能显著对抗CCl4导致的肝纤维大鼠血清中ALT，AST的活性升高。表2 黄根醇提物对CCl4致肝纤维化大鼠血清中ALT，AST活性的影响（略）
3.3 黄根醇提物对大鼠血清中TP，ALB，GLB，A/G的影响见表3。常规分离血清，按照说明书的要求测试大鼠血清中的TP（血清总蛋白）、ALB（血清白蛋白）的含量，并计算出GLB（血清球蛋白）的含量和A/G（白蛋白/球蛋白比值）的比值。与正常对照组比较，模型组血清TP，ALB的含量和A/G的比值远远低于正常对照组（P<0.01），模型组大鼠血清中ALB含量降低的同时GLB含量相应增加，提示造模成功。与模型组比较，黄根醇提物各剂量组大鼠血清中TP，ALB的含量和A/G的比值明显升高（P<0.01），而GLB的含量明显降低（P<0.01）。结果提示，黄根醇提物能显著对抗CCl4导致的肝纤维化大鼠血清中TP的含量和A/G比值的降低，亦能对抗血清中ALB和GLB含量的逆转。表3 黄根醇提物对CCl4致肝纤维化大鼠血清TP，ALB，GLB及 A/G的影响(略)
3.4 黄根醇提物对大鼠血清中肝纤维化四项的影响结果见表4。常规分离血清，按照说明书的要求测试大鼠血清中的的HA（透明质酸）、LN（层黏连蛋白）、PCⅢ（Ⅲ型前胶原）、CⅣ（IV型胶原）的含量。与正常对照组相比,模型组大鼠血清中HA，LN，PCⅢ，CⅣ的含量均显著升高(P<0.01)，提示造模成功。与模型组比较， 黄根醇提物各剂量组大鼠血清中HA，LN，PCⅢ，CⅣ的含量明显降低（P<0.01）。与高剂量组比较，中剂量组大鼠血清中LN的含量有显著性差异（P<0.05），低剂量组大鼠血清中HA，PCⅢ的含量有显著性差异（P<0.05）。结果提示：黄根醇提物能显著对抗CCl4导致的肝纤维化大鼠血清中HA，LN，PCⅢ，CⅣ含量的升高，因此黄根醇提物能显著抑制CCl4对肝组织的影响。表4 黄根醇提物对CCl4致肝纤维化大鼠血清HA，LN，PCⅢ，CⅣ的影响（略）
3.5 黄根醇提物对大鼠肝组织中SOD活性，MDA，GSH-Px水平的影响见表5。常规取出大鼠的肝组织，并用生理盐水做成10%的肝匀浆，按照说明书的要求测试SOD（超氧化物歧化酶）的活性和MDA（丙二醛）、GSH-PX（谷胱甘肽过氧化物酶）的水平。与正常组比较，模型组大鼠肝组织中SOD活性、GSH-Px水平显著降低（P<0.01），MDA水平显著增加（P<0.01），提示造模成功。与模型组比较，黄根醇提物各剂量组大鼠肝组织中MDA的含量显著降低（P<0.01）， 而肝组织中的SOD的活力和GSH-Px的水平显著增强（P<0.01）。与黄根高剂量组比较，黄根低剂量组大鼠肝组织中的的MDA的水平有显著性差异（P<0.05）。结果提示，黄根醇提物能显著对抗CCl4导致的肝脏纤维化大鼠肝组织中MDA的升高，同时能显著对抗肝组织中SOD的活力和GSH-Px水平的降低。 表5 黄根醇提物对CCl4致肝纤维化大鼠肝组织中SOD活性的影响和肝组织中MDA，GSH-Px水平的影响(略)
3.6 黄根醇提物对大鼠肝组织中Hyp的影响结果见表6。常规取出大鼠的肝组织，按照说明书的要求测试肝组织中Hyp（羟脯氨酸）的含量。与正常组比较，模型组大鼠肝脏Hyp含量显著升高（P<0.01），提示造模成功。与模型组比较，黄根醇提物各剂量组大鼠肝组织中Hyp的含量明显降低（P<0.01）。结果提示：黄根醇提物能显著对抗CCl4导致的肝纤维化大鼠肝组织中Hyp含量的升高。表6 黄根醇提物对CCl4致肝纤维化大鼠肝脏组织Hyp含量的影响(略)
4 讨论
肝纤维化形成机制极其复杂，中药含有多种活性成分，可以发挥综合作用，在抗肝纤维化方面体现出独特优势。许多中药诸如丹参、桃仁、虫草菌丝、汉防己、姜黄等在临床和实验研究中已被证实具有较好的抗肝纤维化作用［6］。本实验采用CCl4导致肝纤维化大鼠模型研究黄根醇提物对肝纤维化的影响。结果表明黄根醇提物可显著抑制血清ALT,AST的升高，使ALB合成增加、A/G值升高，表示肝细胞再生和合成功能进一步加强，说明黄根醇提物能明显改善肝功能，具有抑制肝细胞、肝损伤的作用。血清HA，LN，PCⅢ和肝组织Hyp测定结果表明，黄根醇提物可以明显抑制胶原纤维的增生，能抑制肝脏胶原纤维合成沉淀，具有抗肝纤维化的作用［7］。
CCl4诱导大鼠肝纤维化过程中，脂质过氧化是其主要的肝损伤形成机制［8］。模型组大鼠肝组织脂质过氧化产物MDA大量生成，SOD和GSH-Px活性受到明显抑制。黄根醇提物能明显降低肝纤维化大鼠肝组织中的MDA的水平和SOD，GSH-Px的活性，说明黄根醇提物能提高肝组织的抗氧化酶（SOD和GSH-Px）活性，抑制自由基的产生，促进其清除，并能抑制氧自由基(OFR)引起的脂质过氧化反应, 使丙二醛(MDA)生成减少，从而对肝组织起保护作用，使大鼠肝纤维化减轻，提示抗脂质过氧化作用可能是其抗肝纤维化的作用机理之一。
迄今为止，国内外对黄根各个方面的研究都很少，其仍处于待深入研究开发的状态，且其现研究重点主要集中在矽肺的治疗上，对其抗肝纤维化作用的研究很少有人涉及，因此本研究具有创新性，将为开发抗肝纤维化的新药提供科学依据。 |
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