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jianglay

新虫 (初入文坛)

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专业: 细胞生物学研究中的新方法

[求助] 跪求TMB显色液可行的自制方法！！

已经试过好多方法，用DMSO或者无水乙醇溶解TMB然后定容的方法行不通，一定容就出现浑浊，有东西沉淀；直接用DMSO或乙醇溶解后按比例与底物液（主要是pH5.5 磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液+过氧化氢脲或30%H2O2）颜色很淡且不灵敏，不知道是不是比例不对，跪求

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喔列打击哇刚大木达

1楼 2011-07-18 19:20:25

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dylee

金虫 (著名写手)

Immunoassay-Man

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专业: 生化分析及生物传感

【答案】应助回帖

自配TMB底物（TMB/H2O2)由273 µL TMB母液（375 mg TMB溶于30 mL DMSO）和138 µL 1% H2O2 在使用前现混于15 mL底物稀释液（pH 3.8）获得。底物稀释液由46.04 g 柠檬酸钾（Sigma 60215）和0.10 g山梨酸钾（Sigma 85520）加热溶解后用水定容到1L配得。

参考文献：Cervino, C., Weber, E., Knopp, D. and Niessner, R. "Comparison of hybridoma screening methods for the efficient detection of high-affinity hapten-specific monoclonal antibodies" Journal of Immunological Methods 329 (2008) 184 - 193.

这是一个很好的TMB配方，大牛使的。