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拟南芥转基因种子筛选
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1.weigh 25-30 mg/1.5 Tube Seeds. Add 1 ml 75% Etoh containing 0.05% Tween 20. Shaking for 10-15 minutes on a shaker at ~300rpm.摇时将小管插进海绵垫横向放置。 2.spin bircfly.remove supermatant using 1ml pipett 3.Add 1 ml 95% EtoH, wash briefly,spin, remove EtoH. 4.Repeat stop 3 once or twice. 5. Under hood , add 0.3 ml 100%EtoH to each tube , remove the seeds onto sterile filter paper by pipetting and leave to dry . 6. Evenly spread the seeds onto 1/2 MS plates containing appropriate antibiotics. 7.seal the plates weth parafilm and wrap with foil ,In cubate at 4℃ for 2 days. 8.Grow at 22℃ under 16 h light/8h dank. Note: 第1、2步的操作时间加起来不能超过15分钟。3、4 两步要迅速，第五步加入EtoH要一管一管操作，每加一管立即移到滤纸上。总之，整个操作过程要快，尽量减少与乙醇的接触时间。否则，种子会被杀死。因为种子在第一步后吸胀，对乙醇很敏感。 准备工作○1配 75%乙醇加0.05% Tween 20 ○295%乙醇（AR）○3无水乙醇（AR）○4灭菌滤纸、及培养皿，○5培养基（固体）1/2MS+Ar 操作步骤： ○1将筛干净的种子置于小离心管中，盖好盖子，摇8分钟。 ○2 待种子沉下来后将乙醇吸出，用95%乙醇洗种子3次（每次1毫升，95%乙醇吸出上清液再加入95%乙醇） ○3将洗好的种子用0.3毫升无水乙醇、重悬用枪边吹将种子悬浮于无水乙醇中，边吸出均匀地吹打在已灭菌的滤纸上，吸干30秒后用镊子将滤纸夹出，平夹滤纸 ，将种子均匀地撒在培养基上。 ○4春化 将播种的培养皿封好外包报纸，置于4度放2天 ○5培养，将纯化2天的平皿去掉报纸，置于人工气候箱中正常培养。 播种： 直接播种与土地中，先筛好土，按土3份螲石1份比列混合，分装于小盆中，土上面再薄薄地撒上一层蛭石时期充分吸水，备用，将种子放入小管中，再加入1ml水，盖紧盖子外包一层锡纸避光放入4度，春化2天直接播入土中播种时用枪反复吹吸，当枪头中只有1粒种子时，再吹入土中每盆6-8粒盖膜直至种子萌发。两片子叶后方可打开。约7-10天。 |
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