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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 突变体保存
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wangdandelia

木虫 (正式写手)

[交流] 突变体保存 已有4人参与

请问各位大侠，我要保存上万个突变体菌株，现在正在挑取突变体菌落，这么多的突变体如何保存呢？
师姐之前是将菌落在平板上划长线，然后用96孔板-80℃保存，96孔板里面包含100uL的60%的甘油，200uL的液体培养基，然后将划线长好的菌刮下来，各自放在对应的96孔板里。我考虑到划线的菌体放到孔里面，不容易混匀，而且96孔板的孔很密集，一不小心就会流入其他孔中，不能保证纯种保存。
请问大家都有什么好办法来保存大量突变体呢？期待大家的回复啊~~~谢谢咯。。。
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1楼 2011-07-10 08:58:15
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iaminxanadu

木虫 (正式写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
rainwander(金币+1): 鼓励交流 2011-07-13 16:10:09
都用96孔板吧。。。减少装液量，用枪吸打混匀。

还能用啥呢？谁知道说来听听啊
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2楼2011-07-10 17:39:46
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
上万个，除了这个还能怎样保存？
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流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
3楼2011-07-10 18:15:16
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wangdandelia

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by iaminxanadu at 2011-07-10 17:39:46:
都用96孔板吧。。。减少装液量，用枪吸打混匀。

还能用啥呢？谁知道说来听听啊

谢谢哦，请问一般装液量是多少呢？300uL多吗？
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4楼2011-07-11 16:56:31
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iaminxanadu

木虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
scelab(金币+3): xxjl 2011-07-11 22:47:59
引用回帖:
Originally posted by wangdandelia at 2011-07-11 16:56:31:
谢谢哦，请问一般装液量是多少呢？300uL多吗？

多大体系要看你的孔板的规格，不要加那么多。作为保存资源来说有150ul 就行了盖好盖后用保鲜膜包好存放超低温。另外，最好是自己做，哈哈。菌落平板先放在4摄氏度低温保存，慢慢来。
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5楼2011-07-11 21:46:19
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wangdandelia

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by iaminxanadu at 2011-07-11 21:46:19:
多大体系要看你的孔板的规格，不要加那么多。作为保存资源来说有150ul 就行了盖好盖后用保鲜膜包好存放超低温。另外，最好是自己做，哈哈。菌落平板先放在4摄氏度低温保存，慢慢来。

好的，谢谢哦~~请问你们也是将菌落刮到96孔板里面吗？会不会导致菌体分布不均匀呢？是不是先培养一段时间，然后再放甘油保存呢？
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6楼2011-07-12 10:18:01
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srlee

铁杆木虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
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Originally posted by wangdandelia at 2011-07-10 08:58:15:
请问各位大侠，我要保存上万个突变体菌株，现在正在挑取突变体菌落，这么多的突变体如何保存呢？
师姐之前是将菌落在平板上划长线，然后用96孔板-80℃保存，96孔板里面包含100uL的60%的甘油，200uL的液体培养基， ...

这个也就是相当于文库的保存，这么多克隆也可以用384孔板保存。

[ Last edited by srlee on 2011-7-12 at 17:40 ]
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7楼2011-07-12 11:45:39
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wangdandelia

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by srlee at 2011-07-12 11:45:39:
这个也就是相当于文库的保存，这么多克隆也可以用384孔板保存。

[ Last edited by srlee on 2011-7-12 at 17:40 ]

谢谢哦~请问你们是怎样保存的呢？
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8楼2011-07-12 22:15:37
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iaminxanadu

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
Originally posted by wangdandelia at 2011-07-12 10:18:01:
好的，谢谢哦~~请问你们也是将菌落刮到96孔板里面吗？会不会导致菌体分布不均匀呢？是不是先培养一段时间，然后再放甘油保存呢？

确实存在分布不均匀的情况。我做过培养后保存对照和直接保存的，都能顺利复苏。
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9楼2011-07-13 09:42:09
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wangdandelia

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by iaminxanadu at 2011-07-13 09:42:09:
确实存在分布不均匀的情况。我做过培养后保存对照和直接保存的，都能顺利复苏。

好的，知道咯，谢谢你，呵呵~~~
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10楼2011-07-16 13:05:15
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