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320080920001

金虫 (正式写手)

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[交流] 单克隆抗体原理疑问

我在看单克隆抗体时发现一个问题，在用HAT培养基筛选杂交瘤细胞时，我们是通过骨髓瘤细胞的HGPRT和TK酶缺陷在HAT培养基中不能生长，而正常B细胞由于繁殖代数限制而不能生长，只有杂交瘤细胞能够通过补救途径合成DNA而存活。但是问题是如果正常B细胞发生细胞自转化或者人工诱变转化的话又可以生存了，如何避免这一步造成的杂交瘤细胞污染呢？

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1楼 2011-06-30 20:16:04

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xiaoqiang100

铁虫 (小有名气)

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★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
320080920001(金币+5): 谢谢你的解释，说的很好，以后还是要多想想了。不过你说的诱导B细胞自转化，难道以前杂交瘤细胞方法还没有出来时，做单抗没有尝试诱导B细胞自转化吗？ 2011-06-30 23:10:43

呵呵，这个问题问的非常好啊！！
为什么要做单克隆抗体呢，就是因为体外的B细胞由于繁殖代数限制而不能生长，所以需要加入可以永生的骨髓瘤细胞，从而通过细胞培养或者腹水可重复的获得大量的抗体。如果阁下可以使分化程度较高的B细胞发生自转化或者人工诱变转化从而可以永生且稳定的分泌抗体的话，恭喜你啊，同学，只要你把专利搞到手，成为下一比尔盖茨不是梦！
扯远了，首先，至少我不知道在做细胞融合的时候能产生什么条件使得正常B细胞发生细胞自转化或者人工诱变转化，从而使其生存下来。其次，如果真的发生了，而且这种B细胞可以永久繁殖且分泌抗体的话，你就可以准备申请专利然后过亿万富翁的生活了。最后，如果正常B细胞发生细胞自转化或者人工诱变转化而获得了永生能力，但失去了分泌抗体的能力的话，由于杂交瘤是贴壁的，B细胞是悬浮的，应该可以分开的。如果正常B细胞发生细胞自转化或者人工诱变转化变成了贴壁细胞，那也可以通过亚克隆的方法来将杂交瘤细胞和B细胞分开。其方法也很简单，在96孔板中通过梯度稀释，使得一个孔中只有一个或几个细胞，然后让细胞繁殖，然后通过ELISA检查该孔中有没有抗体。如果有，那么这个孔肯定只有杂交瘤细胞；如果没有抗体，则为B细胞。经过几次的亚克隆，基本就能获得几株完全为杂交瘤的细胞株。