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1104水金虫 (正式写手)
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[求助]
水痘病毒Ellen株(ATCC VR-1367)的复苏、冻存
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实验室新购买了水痘病毒Ellen株(ATCC VR-1367),但是说明说给的很简略,之前也没操作过,所以想请教高手。不胜感激!!! 1、打算用MRC-5细胞复苏,复苏时接菌量怎么定呢? 当细胞单层后(25平方厘米的培养瓶),倒掉培养液,用1*PBS洗涤细胞面,然后将病毒(1ml)加入到培养瓶,吸附,再加入10ml的维持液进行培养。这么操作对么? 如果病毒是冻干粉,要用什么液体进行复溶呢? 2、收毒后进行冻存,想用两种方法,有细胞悬液和无细胞悬液两种方法。因为下一步想用病毒免疫动物,以获得血清,那么加入何种保护剂不影响毒力呢?保护剂的比例(最终比例)是多少?两种冻存的方法加入的保护剂可以相同么? 冻存时需要梯度降温么?我们打算-80度或者液氮冻存 冻存液用什么呢? |
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