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zyq__915328

金虫 (正式写手)

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[交流] 10分钟学会HP1100系列高效液相色谱仪基本操作

1、仪器组成：
1.1各台HP1100系列高效液相色谱仪大致组成如下：溶剂瓶及安放箱、真空在线脱气机、高压输液泵、柱温箱、VWD检测器、进样装置、计算机工作站及其外设。
2、准备工作：
2.1根据个人实验需要配好动相流（不少于200ml）并用微孔滤膜滤过，其中的两台高效液相色谱仪为单元泵，需事先超声15分钟左右进行脱气处理。
2.2一般将水相置于棕色瓶A中（因水相在见光条件下容易滋生细菌），有机相置于其它瓶中。
3、启动仪器：
3.1打开计算机，启动电脑至桌面后，将CAG Bootp Server窗口最大化。
3.2依次打开HP1100系列高效液相色谱仪的真空在线脱气机、高压输液泵、柱温箱、VWD检测器的电源开关。
3.3等待3至5分钟，至HP1100各部件自检完毕，并且CAG Bootp Server窗口接收到1100传来的7行联通完毕的信息后，将CAG Bootp Server窗口最小化，双击桌面上的instrument1 online图标启动化学工作站。
4、建立新方法：
4.1启动化学工作站后，左键单击View菜单，选择Method and Run Control，进入Method and Run Control界面（界面上有泵、柱温箱检测等的示意图标）。
4.2单击Method菜单，选择Edit entire Method选项，进入方法编辑窗口。
4.3遵照设置向导依次进入：Edit method:Instrument1窗口，不必修改，按OK按钮；进入Method information: Instrument1窗口，输入对本方法的说明文字，按OK按钮；进入Setup Pump:Instrument1窗口，在Control-flow后输入流动相流速，在Control-stoptime后输入样品运行时间长度，在Control-posttime后输入需要平衡液相柱的时间长度，在Solvents项下输入各瓶中流动相的比例，如果要进行梯度洗脱，在Timetable项下设置梯度洗脱的程序菜单，按OK按钮；进入VWD signal:Instrument1窗口，在Sigal-wavelenth后输入所用检测波长，在Time-stoptime后输入记录谱图信号时间长度，按OK按钮；进入Signal Details: Instrument1窗口，不必修改，按OK按钮；进入Edit integration events窗口，设定参照（6、谱图的优化），按OK按钮；进入Specify Report: Instrument1窗口，设定参照（7、报告的打印），按OK按钮；进入Instrument Curves: Instrument1窗口，不必修改，按OK按钮；进入Run Time Checklist: Instrument1窗口，选中Data Acquisition前的方框，按OK按钮，完成整个方法的编辑。
4.4单击Method菜单，选择Save Method As…选项，命名为自己的方法后保存。
注：在Method and Run Control窗口下，依次左键单击泵、柱温箱、检测器等示意图标，在弹出的快捷菜单中选择Set up项，也可以进行方法的编辑。但最后一定要按4.4操作，将方法另存，以防覆盖了别人设定好的方法。此快捷操作在样品测定时实时对方法进行修改很有用处。另如果自己的方法已经存在，单击Method菜单，选择Load Method …选项可以进行调用而不必重新编辑。
5、运行样品：
5.1方法建立好后，先观察输液管中有无气泡，如有汽泡，要先进行排出气泡的操作：手动逆时针旋转Purge阀二至三圈，将Purge阀打开，将泵流量设为5ml/min（左键单击泵图标，在弹出的快捷菜单中选择Setup Pump，在Setup Pump:Instrument1窗口下将Flow项下的值改5。），打开泵（左键单击泵图标，在弹出的快捷菜单中选择Control…，在Control  Pump:Instrument1窗口点中On。）至废液管中无气泡，将泵流量改为原来的值，顺时针旋转Purge阀，将Purge阀关紧。
5.2单击Istrument菜单，选择System On项（或单击系统图标右下方on按钮），将泵、柱温箱、检测器打开。
5.3单击View菜单，单击Online Signals,选择Signal Window1，在打开的窗口中可以看到采集的信号。
5.4等待Online Plot信息窗口中基线平稳后，单击RunControl菜单，选择Sample Info…，在Sample Info :Instrument1窗口中输入操作者姓名，存盘文件名及样品参数。编辑完成后按Ok按钮退出。
5.5单击line Plot信息窗口中Balance按钮，等待窗口提示Ready后，即可进行进样分析。
5.6进样后，检测器同时开始记录数据，当时间至设定的StopTime，仪器自动停止测定并显示谱图。
6、谱图的优化
6.1左键单击View菜单，选择Data Analysis，进入Data Analysis窗口。
6.2左键单击File菜单，选择Load Signal，进入Load Signal：Instrument1窗口，在D:\Data\…下找到自己的文件，按OK按钮，即可看到自己的谱图全貌。
6.3左键单击Integration菜单，选择Integration Events…，在所显示的窗口左边有一个积分参数表，有Slope Sensitivity（斜率），Peak Width（峰宽）， Area Reject（面积拒绝值），Height Reject（峰高拒绝值），Shoulder（肩峰）等项，根据个人需要进行修改，修改完毕后，点击表上方一排快捷图标中倒数第二个快捷图标，系统提示：是否保存对积分参数表的修改，单击Yes按钮，即可看到优化后的谱图全貌。
7、报告的打印
7.1重复6.1及6.2操作，调出需要打印的谱图。
7.2左键单击Report菜单，选择Specify Report…，进入Specify Report：，Instrument1窗口，对报告的格式进行定义。在Destination框中，依次选中Printer，File和TXT前面的方框；在Report Style框中，从Style后的下拉框中选择Detail（报告中提供保留时间、峰高、峰面积、峰面积百分比等参数）或Performance（报告中提供分离因子、对称性、塔板数、分离度等参数）；在Chromatogram Output框中Size项下调节谱图所占页面的比例。最后点击Ok按钮退出。
7.3左键单击File菜单，选择Print Preview，进行打印报告的预览。
7.4左键单击File菜单，选择Print，进行报告的打印。
8、冲柱及关机
8.1 实验完毕后，要冲洗色谱柱：先关闭检测器（左键单击检测器图标，在弹出的快捷菜单中选择Control…，在Control  VWD:Instrument1窗口点中Off），并让泵暂停（左键单击泵图标，在弹出的快捷菜单中选择Control…，在Control  Pump:Instrument1窗口选Standby），然后将棕色瓶A更换为盛有80%甲醇或80%乙腈的自备瓶，打开泵（左键单击泵图标，在弹出的快捷菜单中选择Control…，在Control  Pump:Instrument1窗口点中On），并左键单击泵图标，在弹出的快捷菜单中选择Setup Pump，在Setup Pump:Instrument1窗口下将Solvent项下A瓶流动相的比例改为100%，点击Ok按钮退出。让系统运行30～40分钟，即可按下面的操作关机。
8.2左键单击File菜单，选择Exit，退出化学工作站。
8.3单击Instrument菜单，选择System Off项（或单击系统图标右下方off按钮），将泵、柱温箱等关闭。
8.4关闭CAG Bootp Server窗口，并关闭电脑。
8.3依次关闭HP1100系列色谱仪VWD检测器、柱温箱、高压输液泵、真空在线脱气机电源。
8.5填写使用登记。

注意：当泵系统图标中溶剂瓶标志变黄时，要及时添加溶剂，否则仪器在溶剂量小于0.15L会自动停止运行。添加溶剂后，左键单击溶剂瓶图标，在弹出的快捷菜单中选择Solvent bottle Filling…项，在 Solvent bottle Filling：Instrument1窗口中的Actual Volume下输入各瓶中实际溶剂量。

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