【答案】应助回帖

11楼2011-06-21 23:09:23

zboter

银虫 (正式写手)

应助: 3 (幼儿园)
金币: 255.5
帖子: 372
在线: 107.5小时
虫号: 865716
注册: 2009-10-08
性别: GG
专业: 生物大分子结构与功能

建议重新克隆，PCR使用保真酶

12楼2011-06-22 21:03:42

amilie030312

金虫 (正式写手)

MolEPI: 2
应助: 7 (幼儿园)
金币: 644.8
帖子: 407
在线: 47.3小时
虫号: 296900
注册: 2006-11-18
专业: 动物遗传学

★ ★
西瓜(金币+2): 是的 2011-06-23 14:48:06

直接找高保真酶PCR就可以了，不过要注意真正的高保真PCR酶末端是完全没有A的，必须要做一步3‘加A的步骤才能克隆到T载体里，如果哪家忽悠他们的酶是高保真酶还能直接克隆到T载体里那这款酶要么根本就不是高保真酶，要么是高保真酶和Taq的混合酶，理解了原理就不会那么容易被忽悠了。

赞一下(1人)

13楼2011-06-23 10:12:59

zhcosa

金虫 (小有名气)

MolEPI: 1
应助: 2 (幼儿园)
金币: 557.3
红花: 2
帖子: 87
在线: 31.1小时
虫号: 1287920
注册: 2011-05-06
专业: 水产生物免疫学与病害控制

★ ★ ★
西瓜(金币+3): 鼓励交流 2011-06-23 14:48:18

还是重新克隆比较便宜快捷吧！
这个突变有没有引起氨基酸变化呢？对分子构象和功能影响很大么？说不定就是不同个体间一级结构的微小差异，SNP之类的也说不定。要是没什么影响就不要太顾虑了吧……祝你好运

赞一下(1人)

14楼2011-06-23 10:50:46

空谷幽风

金虫 (正式写手)

MolEPI: 32
应助: 13 (小学生)
贵宾: 0.05
金币: 1106.1
散金: 500
红花: 13
帖子: 615
在线: 116.5小时
虫号: 714271
注册: 2009-03-04
性别: GG
专业: 生物大分子结构与功能

送鲜花一朵

如果你只测了一个克隆有突变的话那就多送测几个，看有没有序列正确的。如果是送测的全是在那个位置有突变可以做定点修复

a?,c??ae~?a,EURc§?c?μé-,cs,,a‘?é?“i1/4?i1/4?i1/4?i1/4?

15楼2011-06-26 21:48:58

sfb1020

金虫 (小有名气)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 1271.3
红花: 2
帖子: 241
在线: 68小时
虫号: 466293
注册: 2007-11-23
性别: GG
专业: 保护生物学与恢复生态学

我也出现过这种问题，老有点突变，就是测序时多测几个，总有一个是正确的

16楼2011-06-27 10:17:54

chenyanzhen

铁虫 (小有名气)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 1225.6
散金: 111
帖子: 143
在线: 40.1小时
虫号: 2066815
注册: 2012-10-17
性别: MM
专业: 生物化学

引用回帖:

4楼: Originally posted by 天使托 at 2011-06-17 21:59:40
1:首先看楼主是做什么用了，做什么用很关键的，你如果想表达蛋白，那么重新克隆吧。。。如果是做敲除，构建重组载体，那大可不必。

2：其实见第一条，已经说了，目的不同，操作不同，思路也不同；

3：祝好运！

如果是用来做阳性对照呢，有影响吗？

活在当下，充实自己

17楼2014-06-12 17:30:55