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imyting

至尊木虫 (正式写手)

个人觉得用朗伯-比尔定律来把吸光值转换成浓度时不靠谱的,这个公式可以看做是y=kx的线性,就是吸光值与浓度之间的正相关,但是对于不同的仪器,甚至是测酶活时缓冲液的不同都会导致这个公式的不准确。我一般是自己测一个标准曲线,y=kx+b,然后把吸光值转换成底物浓度,直接用底物浓度的变化来求最大速度。
悠哉游哉做实验,成兮败兮我随便
11楼2012-12-01 02:13:08
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xiaoye417

新虫 (初入文坛)

请问??有没有使用分光光度计测土壤中的微生物??碳??氮??磷的方法啊,本人试验室没有什么高级仪器,???有一???紫外分光光度计,能??能将??蒸和未??蒸的土壤??????液按照测水样中的碳??氮??磷的方法使用分光光度计去测呢?
12楼2013-01-17 21:07:29
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Drimmy

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2460511楼: Originally posted by miaomiaomao at 2012-11-28 21:47:42
不知楼主的问题解决没有?我也有疑惑,测定出来的吸光值怎么转化为酶反应的初速率?是不是用前段直线部分的斜率当做反应初速率?酶活力是不是也是用斜率乘以稀释倍数?虫友帮帮忙啊!感激不尽!

请问 你的问题也解决了吗?  我正在困惑中,,,请问 是不是 通过做 酶反应产物的  标准曲线,再将吸光值 代入 求得 酶反应的产物量,,再除以 时间,就是酶的反应 速度了??摆脱 看到 也回复下哈!感激不尽
13楼2013-03-11 19:30:32
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Drimmy

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2461126楼: Originally posted by imyting at 2012-12-01 02:13:08
个人觉得用朗伯-比尔定律来把吸光值转换成浓度时不靠谱的,这个公式可以看做是y=kx的线性,就是吸光值与浓度之间的正相关,但是对于不同的仪器,甚至是测酶活时缓冲液的不同都会导致这个公式的不准确。我一般是自己 ...

虫友你好O(∩_∩)O~
我也是觉得 应该通过 反应产物的标准曲线和测定OD值 来求得  产物量,,然后 除以时间  得到 反应速率~~   我的疑问是:做 酶反应动力学曲线的时候,怎么确定底物的浓度梯度?如何求得 底物过饱和度呀? 江湖救急~~ 朋友看到的话,帮忙回复下 好吗?感激不尽
14楼2013-03-11 19:35:48
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imyting

至尊木虫 (正式写手)

引用回帖:
2484012楼: Originally posted by Drimmy at 2013-03-11 19:35:48
虫友你好O(∩_∩)O~
我也是觉得 应该通过 反应产物的标准曲线和测定OD值 来求得  产物量,,然后 除以时间  得到 反应速率~~   我的疑问是:做 酶反应动力学曲线的时候,怎么确定底物的浓度梯度?如何求得 底物过 ...

你好,首先我是用底物的减少的速度来代替产物生成速度的;测酶反应动力学时底物的浓度梯度是有要求的,好像有些文献说是底物Km值的20-100倍,不过,我没有照着这个做,我是根据底物的标准曲线(OD:0-3,我们的最大只测到3)选定了九个底物浓度梯度测的。至于底物过饱和度,我是用固定底物浓度下的速度除以最大速度算的。
悠哉游哉做实验,成兮败兮我随便
15楼2013-03-12 15:24:56
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凌波丽

专家顾问 (知名作家)

我贴了一些参考文献,楼主可以参考。

http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=5870232&fpage=1
16楼2013-05-09 22:25:59
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凌波丽

专家顾问 (知名作家)

我贴了一些参考文献,楼主可以参考。

http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=5870232

上贴网址可能有错,内容比较多,而且我最不愿打字录入了。
17楼2013-05-10 00:10:44
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sissiwrx

新虫 (初入文坛)

我还有公式呢,谁帮我解决下??感激涕零  y=0.0041x+0.011,那么它的Km及Vmax分别是多少?
18楼2013-06-11 16:36:54
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miaomiaomao

金虫 (小有名气)

引用回帖:
13楼: Originally posted by Drimmy at 2013-03-11 19:30:32
请问 你的问题也解决了吗?  我正在困惑中,,,请问 是不是 通过做 酶反应产物的  标准曲线,再将吸光值 代入 求得 酶反应的产物量,,再除以 时间,就是酶的反应 速度了??摆脱 看到 也回复下哈!感激不尽...

我没有做标准曲线,而是利用斜率计算的,建议你参考一下陈清西老师的文章书籍
吃嘛嘛香
19楼2013-10-09 11:42:31
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走走周

新虫 (初入文坛)

我想问下,摩尔吸收系数楼主是怎么查到的
20楼2013-11-05 17:54:05
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