紫外分光光度法测的吸光值怎么转化为酶反应初速度呢？ - 微生物 - 实验/技术

悠哉游哉做实验，成兮败兮我随便

11楼2012-12-01 02:13:08

xiaoye417

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12楼2013-01-17 21:07:29

Drimmy

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2460511楼: Originally posted by miaomiaomao at 2012-11-28 21:47:42
不知楼主的问题解决没有？我也有疑惑，测定出来的吸光值怎么转化为酶反应的初速率？是不是用前段直线部分的斜率当做反应初速率？酶活力是不是也是用斜率乘以稀释倍数？虫友帮帮忙啊！感激不尽！

请问你的问题也解决了吗？我正在困惑中，，，请问是不是通过做酶反应产物的标准曲线，再将吸光值代入求得酶反应的产物量，，再除以时间，就是酶的反应速度了？？摆脱看到也回复下哈！感激不尽

13楼2013-03-11 19:30:32

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2461126楼: Originally posted by imyting at 2012-12-01 02:13:08
个人觉得用朗伯-比尔定律来把吸光值转换成浓度时不靠谱的，这个公式可以看做是y=kx的线性，就是吸光值与浓度之间的正相关，但是对于不同的仪器，甚至是测酶活时缓冲液的不同都会导致这个公式的不准确。我一般是自己 ...

虫友你好O(∩_∩)O~
我也是觉得应该通过反应产物的标准曲线和测定OD值来求得产物量，，然后除以时间得到反应速率~~ 我的疑问是：做酶反应动力学曲线的时候，怎么确定底物的浓度梯度？如何求得底物过饱和度呀？

江湖救急~~ 朋友看到的话，帮忙回复下好吗？感激不尽

14楼2013-03-11 19:35:48

imyting

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2484012楼: Originally posted by Drimmy at 2013-03-11 19:35:48
虫友你好O(∩_∩)O~
我也是觉得应该通过反应产物的标准曲线和测定OD值来求得产物量，，然后除以时间得到反应速率~~ 我的疑问是：做酶反应动力学曲线的时候，怎么确定底物的浓度梯度？如何求得底物过 ...

你好，首先我是用底物的减少的速度来代替产物生成速度的；测酶反应动力学时底物的浓度梯度是有要求的，好像有些文献说是底物Km值的20-100倍，不过，我没有照着这个做，我是根据底物的标准曲线（OD：0-3,我们的最大只测到3）选定了九个底物浓度梯度测的。至于底物过饱和度，我是用固定底物浓度下的速度除以最大速度算的。

悠哉游哉做实验，成兮败兮我随便

15楼2013-03-12 15:24:56

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我贴了一些参考文献，楼主可以参考。

http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=5870232&fpage=1

16楼2013-05-09 22:25:59

凌波丽

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我贴了一些参考文献，楼主可以参考。

http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=5870232

上贴网址可能有错，内容比较多，而且我最不愿打字录入了。

17楼2013-05-10 00:10:44

sissiwrx

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我还有公式呢，谁帮我解决下？？感激涕零 y=0.0041x+0.011，那么它的Km及Vmax分别是多少？

18楼2013-06-11 16:36:54

miaomiaomao

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13楼: Originally posted by Drimmy at 2013-03-11 19:30:32
请问你的问题也解决了吗？我正在困惑中，，，请问是不是通过做酶反应产物的标准曲线，再将吸光值代入求得酶反应的产物量，，再除以时间，就是酶的反应速度了？？摆脱看到也回复下哈！感激不尽

...

我没有做标准曲线，而是利用斜率计算的，建议你参考一下陈清西老师的文章书籍

吃嘛嘛香

19楼2013-10-09 11:42:31

走走周

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我想问下，摩尔吸收系数楼主是怎么查到的

20楼2013-11-05 17:54:05