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Juliana芷蕊金虫 (小有名气)
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[求助]
紫外分光光度法测的吸光值怎么转化为酶反应初速度呢？
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如题，我是用紫外光度法中的动力学测木素过氧化物酶（Lip）的酶活， （测定方法： 取0.6 mL待测酶液，同时加入0.6 mL的10 mmol/L藜芦醇溶液，1.8 mL的酒石酸缓冲液（pH=3.0） 250 mmol/L，用0.03 mL，40 mmol/L的H2O2启动反应，总体积3.0 mL，25 ℃反应3 min，在310 nm（ε310=9300 mol-1cm-1）波长下测定吸光度的变化。同反应体系做空白样为不加入H2O2启动反应。一个酶活力单位（U）定义为每分钟氧化藜芦醇产生1 μmol藜芦醛所需的酶量。） 问题是我测的曲线吸光度变化不大，而且各段的斜率不一，这样在计算酶活时选线性部分我就很困惑，不知道怎么选点比较好，平行样之间的平行性也不好，还有就是通过吸光度变化怎么转化成反应初速度呢？我做的是酶催化动力学，做动力学对条件要求是不是很苛刻呢？现在濒临崩溃，忠心希望各位师长能给些提点，小妹不胜感激。 |
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imyting
至尊木虫 (正式写手)
- 应助: 66 (初中生)
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- 专业: 生物大分子结构与功能
11楼2012-12-01 02:13:08
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★
wolfebst(金币+5, EPI+1): 鼓励一下 2011-06-16 23:13:45
Juliana芷蕊(金币+3): 我主要想问的是紫外分光光度法测的吸光值怎么转化为酶（Lip）反应初速度，主要想知道转化公式呢，还是谢谢你呢 2011-06-17 08:49:35
wolfebst(金币+5, EPI+1): 鼓励一下 2011-06-16 23:13:45
Juliana芷蕊(金币+3): 我主要想问的是紫外分光光度法测的吸光值怎么转化为酶（Lip）反应初速度，主要想知道转化公式呢，还是谢谢你呢 2011-06-17 08:49:35
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你得先确认你的酶有没有活性 如果有活性的话，理论上是可以测定酶活的 1.动力学的测量数据好坏取决于你的底物浓度和酶的浓度，酶多了反应太快来不及检测。应该将酶液稀释，蛋白量可以用BRADFORD法测定，就我感觉600微升的酶液量挺大的了~ 2.测量的线性范围至少应该是2min,结果才会比较可信。取得时候都是取初始的一段时间，要保证反应速率恒定 |
2楼2011-06-16 23:01:05
3楼2011-06-17 09:02:41
4楼2011-06-17 16:41:51