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The alternative to sequencing and subsequent phylogenetic analysis of clon libraries is to employ TGGE or DGGE to separate the 16S RNA gene clone .Such techniques essentially provide a fingerprint representation of the numerically dominant of different samples。Such techniques essentially provide a fingerprint of the numerically dominant members of the microbial community and allow rapid profiling of the microbial diversity of different samples (59). IN addition ,the TGGE/DGGE patterns can be used to selectively identify 16S Rrna amplicons of interest for characterization（which is achieved by sequencing and phylogenetic analysis ）.Recent years have seen an explosion in the development and application of TGGE and DGGE in human gut microbiology (Table 4 ) 。Zoetendal and coworkers (56)demonstrated the use of TGGE for monitoring the bacterial composition of human fecal samples .Theycompared the PCR-TGGE profiles of 16 healthy adults and identified host-specific patterns reflecting inter-individual variation in the predominant microbiota of stool samples .Some bands were seen in samples from multiple subjects ,suggesting that certain members of the predominant human fecal microbiota were common across the volunteers (56).in addition ,the study encompassed longer-term surveillance of the microbial community of two subjects .The PCR-TGGE profiles of each individual l did not differ greatly with time ,demonstrating that the predominant bacterial species were relatively stable ,Phylogenetic analysis of predominant bacteria was performed via cloning and sequencing .PCR-PGGE of each clone enabled mobility comparisons and showed 45 of the 78 clones had similar mobility to one of the 15 prominent bands of the fecal PCR-TGGE profile. This work demonstrated that the majority of predominant bacterial species represented in the fingerprint did not correspond to known species. |
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zuodg
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cyh2010
2楼2011-06-08 14:18:23
3楼2011-06-08 14:25:04
zuodg
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zuodg
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【答案】应助回帖
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sltmac(金币+1): 谢谢交流~~ 2011-06-09 09:14:54
cyh2010(金币+25, 翻译EPI+1): 非常感谢啊！ 我打算追加金币了 呵呵 2011-06-09 11:53:46
sltmac(金币+1): 谢谢交流~~ 2011-06-09 09:14:54
cyh2010(金币+25, 翻译EPI+1): 非常感谢啊！ 我打算追加金币了 呵呵 2011-06-09 11:53:46
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克隆子文库的测序与进化树分析之外，研究者运用TGGE与DGGE技术研究克隆子16S RNA序列。这些技术可以找出不同样品中数量上占优的指纹代表。这些技术可以找出微生物群落中数量上占优的代表种属作为指纹代表，进而可以快速确定不同样品的微生物多样性问题（59）。 此外，根据TDDE/DGGE带型可以选择性确定感兴趣的16S RNA对应的种属，进而进行表征（通过测序与进化分析）。今年，运用TDDE/DGGE技术研究人类肠道微生物取得了重大进展（表格4）。Zoetendal及其同事证明通过TGGE技术可以检测人类粪便中细菌组成。他们比较了16名健康成年人与专一性寄生病确诊患者的PCR-TGGE类型，结果显示样品中微生物构成存在个体差异。在多目的分析中有些条带多次出现，这表明志愿者粪便样品中存在一些固定微生物群落（56）。此外，他们长期监测了两组粪便样品中的微生物群落。每个个体的PCR-TGGE类型并不随时间剧烈变化，这说明优势细菌种属相对稳定。通过克隆与测序对优势细菌种属进行进化分析。依据每个克隆的PCR-PGGE结果可进行动态比较，78个克隆中有45个克隆与粪便PCR-TGGE结果中的15个优势条带具有类似的动态。该研究表明指纹图谱中大多数优势种属的细菌并不是已知种属。 |
5楼2011-06-09 00:08:07
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