Originally posted by adslye at 2011-06-10 21:48:23:
是高保真酶吗？
换高保真酶看看。可能第一轮的产物是非特异性产物。
引物OK吗？
是自己设计的，还是网上下的。不管怎样确认下。

Originally posted by lw582482481 at 2011-06-13 00:00:03:
做巢式PCR要点：
1  首先第一轮你得有目的带存在，不论有多少杂带或者多么模糊，至少你要的大小的band存在才行（假如在第一轮PCR的时候你没有条带的话，这个时候你就得思考是你的引物或者是你的模板再或者就是你 ...

Originally posted by dreammakerxg at 2011-06-12 15:16:00:
我之前也有过你的问题，建议换个10或20微升的反应体系，还有比如你的外围引物为1和2，内部引物为3和4，那你可以不同组合试试，一轮用1和2，其产物用1和4,3和4,3和2，可能会有结果。

4楼: Originally posted by juliana_zou11 at 2011-06-07 14:36:22
以下仅供参考：
1.第一轮产物电泳确定下是不是目的的
2.第二轮引物确定有没有出问题
3.PCR体系是什么样的，有没有出什么问题，如果前面两个都没问题，这里肯定需要优化，温度不能决定一切
4.实在不行用个梯度PC ...