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louli

铜虫 (小有名气)

[求助] 蛋白质谱

各位虫友们：有了解蛋白质谱的吗？我克隆了一段蛋白并在微生物中表达了此蛋白，现在想做个质谱分析鉴定这个蛋白，请问能鉴定吗怎么做啊？
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【分子生物】EPI帖

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1楼 2011-06-02 14:21:33
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shuifen1108

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
西瓜(金币+7, EPI+1): 很厉害！鼓励应助+鼓励新虫。 2011-06-03 16:27:53
louli(金币+4): 2011-06-10 17:18:08
把蛋白质片段纯化之后  用MALDI-TOF做蛋白质的总分子量，或者用蛋白酶（胰酶）把蛋白片段消化了之后测小肽的分子量，然后搜库分析。蛋白质分子量越小越好分析吧
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5楼2011-06-03 14:31:52
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wangleisdnu

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
西瓜(金币+2): 鼓励 2011-06-02 23:33:52
louli(金币+3): 2011-06-03 12:48:53
using MS what will you expect?
I am sure you can get some peptide to say if it is your target protein,
if you have the antibody, which will be faster to know by western blotting
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有勇气去改变你可以改变的,有度量去容忍你不能改变的,有智慧去区分上面的两种情况http://bbs.bioon.net/bbs/?66210
2楼2011-06-02 21:46:35
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louli

铜虫 (小有名气)
我这个没有抗体啊 ，P的植物中的一段片段，我用SDS-PAGE鉴定了，又用液相定量了，但是文章的评审专家问为什么不做蛋白质谱鉴定呢，我就不知道我这片段能做不，而且怎么做呢 直接拿菌送出去吗还是怎样呢，请告知
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3楼2011-06-03 12:51:18
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souron

至尊木虫 (知名作家)

【答案】应助回帖

louli(金币+3): 2011-06-10 17:17:48
蛋白质直接做质谱（ESI）的话由于所带电荷数不同会出现很多一簇一簇的峰

对鉴定帮助不大

一般蛋白质的鉴定都需要用胰蛋白酶进行酶解，对酶解产生的肽段进行质谱分析，然后通过数据库检索确定肽段所属的蛋白
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4楼2011-06-03 14:10:06
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