应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » pMG36e 构建的奇怪现象
302/3返回列表上一页123下一页
查看: 4890  |  回复: 29
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
本帖产生 1 个 MolEPI ，点击这里进行查看

jayxj

铁杆木虫 (小有名气)
★
西瓜(金币+1): good 2011-10-17 17:10:51
引用回帖:
10楼: Originally posted by cicilyok at 2011-10-15 12:33:33:
楼主，你好！不知道你的问题现在解决没有 我现在用pMG36e也遇到奇怪现象。不知道你和各位有没有什么建议。我转化之后，整个平板长满，（就像平时抗生素失效一样），完全没有办法挑单克隆，感受态用的是大肠杆菌Or ...

你可以设计引物做一下菌落PCR筛选，选择效率高的酶切位点连接。个人感觉1000bp以下的片段相对都好连接，可能是载体：目的基因>1:10的缘故吧。再试试。
赞一下(1人) 回复此楼
11楼2011-10-17 10:04:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

王英kira

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
874164楼: Originally posted by wangzhou79 at 2011-06-08 10:52:40
请问楼主，你在提取pMG36e空载的时候顺利么？我最近也在提取，载体在大肠杆菌DH5a内，加了抗生素可以生长，但是提取质粒电泳后就是看不见条带，不知道什么情况，我增加了菌液量也是不行，请问楼主在提取质粒的时候需 ...

你好，我最近在提取pMG36e空载的时候，也碰到了你这样的问题，载体也在肠杆菌DH5a内，加了抗生素可以生长，但是提取质粒电泳后看不见条带。。。这个问题已经持续一个月了，请问你后来是怎么解决这个问题的？
赞一下 回复此楼
12楼2013-03-25 11:02:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

王英kira

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
874164楼: Originally posted by wangzhou79 at 2011-06-08 10:52:40
请问楼主，你在提取pMG36e空载的时候顺利么？我最近也在提取，载体在大肠杆菌DH5a内，加了抗生素可以生长，但是提取质粒电泳后就是看不见条带，不知道什么情况，我增加了菌液量也是不行，请问楼主在提取质粒的时候需 ...

还有，我提质粒用的是Axypre的质粒小提试剂盒
赞一下 回复此楼
13楼2013-03-25 11:04:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jayxj

铁杆木虫 (小有名气)
质粒小提试剂盒提取效率还是不错的，我们一般每9ml的菌液处理后，收集到一个50ul的收集管里，可以满足酶切检测的需要，克隆则是每200ML菌液常规提取后，沉淀用小提试剂盒1个管用量的溶液处理、收集（50ul，浓度可以满足酶切后回收的要求）。
赞一下(1人) 回复此楼
14楼2013-03-26 09:51:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

mmrf2008

至尊木虫 (著名写手)

开心的朋友
引用回帖:
9楼: Originally posted by wangzhou79 at 2011-06-10 20:11:12
感谢楼主的建议，我用的也是试剂盒提取，可能是菌液量的问题，我再来试一试，很奇怪，我的就是阳性空载在大肠里就是这样不好提取，因为是从别人那里买的质粒，也不知道是不是他给我的质粒有问题，呵呵，总之，十分 ...

您好，请问您遇到的pMG36e从大肠杆菌中不容易提取的难题解决了吗？我现在也遇到了当时您所遇到的这个问题，还麻烦前辈赐教，谢谢。
赞一下 回复此楼
笑看人生，花开花落
15楼2013-04-05 15:51:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

玉天妃儿

木虫 (初入文坛)
我也出现了这个问题，楼主解决了吗？
赞一下 回复此楼
言人少心の慎
16楼2014-09-04 18:24:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jayxj

铁杆木虫 (小有名气)
引用回帖:
15楼: Originally posted by mmrf2008 at 2013-04-05 15:51:21
您好，请问您遇到的pMG36e从大肠杆菌中不容易提取的难题解决了吗？我现在也遇到了当时您所遇到的这个问题，还麻烦前辈赐教，谢谢。...

见14楼
回复此楼
17楼2014-09-05 17:55:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jayxj

铁杆木虫 (小有名气)
引用回帖:
16楼: Originally posted by 玉天妃儿 at 2014-09-04 18:24:46
我也出现了这个问题，楼主解决了吗？

换了感受态细胞，就好多了。一定要用高效的感受态细胞
赞一下 回复此楼
18楼2014-09-05 18:01:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

玉天妃儿

木虫 (初入文坛)
引用回帖:
18楼: Originally posted by jayxj at 2014-09-05 18:01:43
换了感受态细胞，就好多了。一定要用高效的感受态细胞...

嗯，谢啦
回复此楼
言人少心の慎
19楼2014-09-05 19:16:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

michelamh

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
10楼: Originally posted by cicilyok at 2011-10-15 12:33:33
楼主，你好！不知道你的问题现在解决没有 我现在用pMG36e也遇到奇怪现象。不知道你和各位有没有什么建议。我转化之后，整个平板长满，（就像平时抗生素失效一样），完全没有办法挑单克隆，感受态用的是大肠杆菌Orig ...

这个问题解决了吗，我最近也遇到这种情况~~~
赞一下 回复此楼
20楼2015-07-31 16:26:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 jayxj 的主题更新
302/3返回列表上一页123下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 一志愿北京化工大学 070300 学硕 336分 求调剂 +4 vv迷 2026-03-22 4/200 2026-03-22 23:29 by king123！
[考研] 0854电子信息求调剂 +3 α____ 2026-03-22 3/150 2026-03-22 21:28 by zhq0425
[考研] 一志愿西安交通大学材料工程专业 282分求调剂 +11 枫桥ZL 2026-03-18 13/650 2026-03-22 20:26 by edmund7
[考研] 北科281学硕材料求调剂 +6 tcxiaoxx 2026-03-20 6/300 2026-03-22 20:23 by edmund7
[考研] 一志愿华中农业071010，总分320求调剂 +5 困困困困坤坤 2026-03-20 6/300 2026-03-22 17:41 by hxsm
[考研] 287求调剂 +8 晨昏线与星海 2026-03-19 9/450 2026-03-22 17:01 by i_cooler
[考研] 能源材料化学课题组招收硕士研究生8-10名 +5 脱颖而出 2026-03-16 17/850 2026-03-22 15:18 by 脱颖而出
[考研] 279分求调剂 一志愿211 +14 chaojifeixia 2026-03-19 15/750 2026-03-21 13:24 by zhukairuo
[考研] 求调剂 +6 Mqqqqqq 2026-03-19 6/300 2026-03-21 08:04 by JourneyLucky
[考研] 307求调剂 +3 wyyyqx 2026-03-17 3/150 2026-03-21 03:20 by JourneyLucky
[考研] 一志愿中国石油大学（华东） 本科齐鲁工业大学 +3 石能伟 2026-03-17 3/150 2026-03-21 02:22 by JourneyLucky
[考研] 一志愿 西北大学 ，070300化学学硕，总分287，双非一本，求调剂。 +3 晨昏线与星海 2026-03-18 3/150 2026-03-21 00:46 by JourneyLucky
[考研] 一志愿西南交通 专硕 材料355 本科双非 求调剂 +5 西南交通专材355 2026-03-19 5/250 2026-03-20 21:10 by JourneyLucky
[考研] 一志愿中国海洋大学，生物学，301分，求调剂 +5 1孙悟空 2026-03-17 6/300 2026-03-19 23:46 by zcl123
[考研] 085600材料与化工求调剂 +6 绪幸与子 2026-03-17 6/300 2026-03-19 13:27 by houyaoxu
[考研] 本科郑州大学物理学院，一志愿华科070200学硕，346求调剂 +4 我不是一根葱 2026-03-18 4/200 2026-03-19 09:11 by 浮云166
[考研] 301求调剂 +4 A_JiXing 2026-03-16 4/200 2026-03-17 17:32 by ruiyingmiao
[考研] 一志愿苏州大学材料工程（085601）专硕有科研经历三项国奖两个实用型专利一项省级立项 +6 大火山小火山 2026-03-16 8/400 2026-03-17 15:05 by 无懈可击111
[论文投稿] 有没有大佬发小论文能带我个二作 +3 增锐漏人 2026-03-17 4/200 2026-03-17 09:26 by xs74101122
[考研] 283求调剂 +3 听风就是雨； 2026-03-16 3/150 2026-03-17 07:41 by 热情沙漠
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭