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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » pMG36e 构建的奇怪现象
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jayxj

铁杆木虫 (小有名气)
★
西瓜(金币+1): good 2011-10-17 17:10:51
引用回帖:
10楼: Originally posted by cicilyok at 2011-10-15 12:33:33:
楼主，你好！不知道你的问题现在解决没有 我现在用pMG36e也遇到奇怪现象。不知道你和各位有没有什么建议。我转化之后，整个平板长满，（就像平时抗生素失效一样），完全没有办法挑单克隆，感受态用的是大肠杆菌Or ...

你可以设计引物做一下菌落PCR筛选，选择效率高的酶切位点连接。个人感觉1000bp以下的片段相对都好连接，可能是载体：目的基因>1:10的缘故吧。再试试。
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11楼2011-10-17 10:04:25
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王英kira

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
874164楼: Originally posted by wangzhou79 at 2011-06-08 10:52:40
请问楼主，你在提取pMG36e空载的时候顺利么？我最近也在提取，载体在大肠杆菌DH5a内，加了抗生素可以生长，但是提取质粒电泳后就是看不见条带，不知道什么情况，我增加了菌液量也是不行，请问楼主在提取质粒的时候需 ...

你好，我最近在提取pMG36e空载的时候，也碰到了你这样的问题，载体也在肠杆菌DH5a内，加了抗生素可以生长，但是提取质粒电泳后看不见条带。。。这个问题已经持续一个月了，请问你后来是怎么解决这个问题的？
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12楼2013-03-25 11:02:32
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王英kira

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
874164楼: Originally posted by wangzhou79 at 2011-06-08 10:52:40
请问楼主，你在提取pMG36e空载的时候顺利么？我最近也在提取，载体在大肠杆菌DH5a内，加了抗生素可以生长，但是提取质粒电泳后就是看不见条带，不知道什么情况，我增加了菌液量也是不行，请问楼主在提取质粒的时候需 ...

还有，我提质粒用的是Axypre的质粒小提试剂盒
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13楼2013-03-25 11:04:03
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jayxj

铁杆木虫 (小有名气)
质粒小提试剂盒提取效率还是不错的，我们一般每9ml的菌液处理后，收集到一个50ul的收集管里，可以满足酶切检测的需要，克隆则是每200ML菌液常规提取后，沉淀用小提试剂盒1个管用量的溶液处理、收集（50ul，浓度可以满足酶切后回收的要求）。
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14楼2013-03-26 09:51:44
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mmrf2008

至尊木虫 (著名写手)

开心的朋友
引用回帖:
9楼: Originally posted by wangzhou79 at 2011-06-10 20:11:12
感谢楼主的建议，我用的也是试剂盒提取，可能是菌液量的问题，我再来试一试，很奇怪，我的就是阳性空载在大肠里就是这样不好提取，因为是从别人那里买的质粒，也不知道是不是他给我的质粒有问题，呵呵，总之，十分 ...

您好，请问您遇到的pMG36e从大肠杆菌中不容易提取的难题解决了吗？我现在也遇到了当时您所遇到的这个问题，还麻烦前辈赐教，谢谢。
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笑看人生，花开花落
15楼2013-04-05 15:51:21
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玉天妃儿

木虫 (初入文坛)
我也出现了这个问题，楼主解决了吗？
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言人少心の慎
16楼2014-09-04 18:24:46
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jayxj

铁杆木虫 (小有名气)
引用回帖:
15楼: Originally posted by mmrf2008 at 2013-04-05 15:51:21
您好，请问您遇到的pMG36e从大肠杆菌中不容易提取的难题解决了吗？我现在也遇到了当时您所遇到的这个问题，还麻烦前辈赐教，谢谢。...

见14楼
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17楼2014-09-05 17:55:36
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jayxj

铁杆木虫 (小有名气)
引用回帖:
16楼: Originally posted by 玉天妃儿 at 2014-09-04 18:24:46
我也出现了这个问题，楼主解决了吗？

换了感受态细胞，就好多了。一定要用高效的感受态细胞
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18楼2014-09-05 18:01:43
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玉天妃儿

木虫 (初入文坛)
引用回帖:
18楼: Originally posted by jayxj at 2014-09-05 18:01:43
换了感受态细胞，就好多了。一定要用高效的感受态细胞...

嗯，谢啦
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言人少心の慎
19楼2014-09-05 19:16:50
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michelamh

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
10楼: Originally posted by cicilyok at 2011-10-15 12:33:33
楼主，你好！不知道你的问题现在解决没有 我现在用pMG36e也遇到奇怪现象。不知道你和各位有没有什么建议。我转化之后，整个平板长满，（就像平时抗生素失效一样），完全没有办法挑单克隆，感受态用的是大肠杆菌Orig ...

这个问题解决了吗，我最近也遇到这种情况~~~
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20楼2015-07-31 16:26:13
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