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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » DAPI染细胞
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Birdie

新虫 (初入文坛)

[求助] DAPI染细胞

请教一个小问题啊：
就是我用DAPI染细胞时，结果染的不仅是细胞核，连带整个细胞都被染了，请问这个是咋回事啊？
我的操作过程：
1. PBS （ph=7.4, 37℃），洗2次，5min 每次
2. 2.5% 戊二醛 20 min
3. PBS洗2-3次，每次5min，吸干
4. 20 ul 稀释的DAPI 染色 10min
5. PBS洗4次，5in/次
6. 吹干拍照

请问哪个步骤有问题啊？谢谢
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1楼 2011-05-19 14:19:32
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windsor0185

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
silicare(金币+3, EPI+1): 鼓励交流 2011-05-27 08:07:10
DAPI浓度多少，  1-2ug/ml，5-10min足够哦~~
一般很容易染，染不好估计就是染料或者细胞有问题了...

另外，洗完了之后别吹干，用50%甘油封下片子拍照试试
赞一下(1人) 回复此楼
知之为知之
2楼2011-05-25 10:14:23
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dianaofyezi

金虫 (正式写手)
染色时间太长或者浓度太高，或者质量问题。
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52187644
3楼2011-05-25 12:25:37
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雪山飞狐7233

铁杆木虫 (著名写手)

铁杆小虫

【答案】应助回帖

我们都用冷的无水乙醇固定。稀释的DAPI染色5min。
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梦在路就在！
4楼2011-05-25 13:52:11
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lw582482481

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
silicare(金币+10): 处女帖，鼓励交流。1mg/ml是浓缩液吧 2011-05-27 08:06:55
实验室用4%PFA室温固定10-15min，然后PBS洗3次，DAPI室温染色一般是1mg/ml，然后PBS洗3次注意避光，洗完之后甘油封片或者是抗淬灭剂封片，注意整个过程中，片子一定不能干，不然会严重影响信号
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30而立
5楼2011-05-26 17:40:28
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lw582482481

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

DAPI浓度错了，10微克/毫升
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30而立
6楼2011-05-28 14:11:28
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