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8814402

至尊木虫 (职业作家)

翻译EPI: 509
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专业: 药物学其他科学问题

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
wenjie(金币+5, 翻译EPI+1): 可以 2011-05-21 14:27:12
sltmac(金币+5): 金币是给的太少了~~~ 2011-05-27 09:44:30

总RNA的提取和RT-PCR
使用QIAGEN 的RNeasy mini protection 试剂盒，从20mg肺和肝组织提取总RNA。提取的RNA的浓度和纯度通过分光光度计测定260/280nm吸收度的比值加以确定。引物由本实验室使用Gene Fisher 引物设计和多重校正软件设计。使用正向引物（FP）5`-GTGTCCTATGGGTCGTGGTA-3` / 反向引物 (RP) 5`-TTCTGGGCTACAGTGAAGGTA-3 (GenBank获取编号：X52883),合成了299-bp 的AST IV cDNA。264-bp的 STa cDNA 通过使用如下引物对合成： FP 5`-TCCTCAAAGGATATGTTCCG- 3`/RP 5`-CAGTTCCTTCTCCATGAGAT-3` (GenBank获取编号：M33329)。引物特异性通过国家生物信息技术中心的开放阅读框软件的BLAST测试。cDNA 的合成由总共1 ug的肝RNA和2 ug 的肺 RNA 在50 uL反应混合物中进行。各种试剂按照供应商的指定浓度加入。作为质控，以相同数量相应来源的RNA合成了500-bp的大鼠β-肌动蛋白cDNA。合成β-肌动蛋白 cDNA的引物对FP 5`-GATGTACGTAGCCATCCA-3`/RP 5`-GTGCCAACCAGACAGCA-3`由本实验室用前述软件设计。

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3楼2011-05-19 09:25:58

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