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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » RNA非变性琼脂糖电泳
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muzihai

银虫 (正式写手)
用DNA电泳槽跑RNA,1%的胶但是RNA降解特别严重，有什么方法可以避免吗？还有蛋白污染，请问怎样才可以有效防止RNA降解还有蛋白污染啊？
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没有过不去的事情，只有过不去的心情！
11楼2011-05-16 22:04:52
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wkl1984

金虫 (小有名气)
★ ★ ★
西瓜(金币+3): Good！ 2011-05-18 11:34:40
引用回帖:
Originally posted by muzihai at 2011-05-16 22:04:52:
用DNA电泳槽跑RNA,1%的胶但是RNA降解特别严重，有什么方法可以避免吗？还有蛋白污染，请问怎样才可以有效防止RNA降解还有蛋白污染啊？

提高电压，跑胶时间缩短，大约20分钟，缓冲液等都要换新的，至于蛋白污染，在氯仿抽提后，再次加入酚氯仿抽提，可以减少蛋白污染，不过RNA有损失
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12楼2011-05-17 13:56:33
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muzihai

银虫 (正式写手)
是离心之后取上清再加酚氯仿吗？是的话，加多少？希望能提供一个详细的步骤，非常感谢
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13楼2011-05-17 19:17:06
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muzihai

银虫 (正式写手)
我一般都用500伏电压，80ma,通常都跑不到二十分钟就停了，但是缓冲液没换新的，等明天再试试
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14楼2011-05-17 19:20:34
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wkl1984

金虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★ ★
西瓜(金币+5): Good 2011-05-18 11:35:28
引用回帖:
Originally posted by muzihai at 2011-05-17 19:17:06:
是离心之后取上清再加酚氯仿吗？是的话，加多少？希望能提供一个详细的步骤，非常感谢

取加入氯仿离心后的上清，加入等体积的酚氯仿，混匀，离心，取上清，加入等体积的异丙醇和0.1体积的乙酸钠（pH,5.2，用无RNA酶的谁配制)，不过防止Rna降解，需要在冰上操作
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15楼2011-05-17 19:38:51
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muzihai

银虫 (正式写手)
好的，非常感谢，可惜我还没学会怎么送金币要不然送你几个金币，呵呵
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16楼2011-05-17 19:49:04
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muzihai

银虫 (正式写手)
请教楼上的酚氯仿的配方，非常感谢
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17楼2011-05-18 10:25:38
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wkl1984

金虫 (小有名气)
★ ★
西瓜(金币+2): 热心 2011-05-18 18:20:46
引用回帖:
Originally posted by muzihai at 2011-05-18 10:25:38:
请教楼上的酚氯仿的配方，非常感谢

是按照体积比配制，酚：氯仿=24:1，注意不要和提取DNA的药品混用，防治被污染，你试试看效果怎样
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18楼2011-05-18 14:52:01
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muzihai

银虫 (正式写手)
好的我先试试效果
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19楼2011-05-18 15:17:51
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wkl1984

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by wkl1984 at 2011-05-18 14:52:01:
是按照体积比配制，酚：氯仿=24:1，注意不要和提取DNA的药品混用，防治被污染，你试试看效果怎样

不好意思，是我写错了，应该是1:1，比较好
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20楼2011-05-18 21:19:10
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