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muzihai

银虫 (正式写手)

用DNA电泳槽跑RNA,1%的胶但是RNA降解特别严重,有什么方法可以避免吗?还有蛋白污染,请问怎样才可以有效防止RNA降解还有蛋白污染啊?
没有过不去的事情,只有过不去的心情!
11楼2011-05-16 22:04:52
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wkl1984

金虫 (小有名气)

★ ★ ★
西瓜(金币+3): Good! 2011-05-18 11:34:40
引用回帖:
Originally posted by muzihai at 2011-05-16 22:04:52:
用DNA电泳槽跑RNA,1%的胶但是RNA降解特别严重,有什么方法可以避免吗?还有蛋白污染,请问怎样才可以有效防止RNA降解还有蛋白污染啊?

提高电压,跑胶时间缩短,大约20分钟,缓冲液等都要换新的,至于蛋白污染,在氯仿抽提后,再次加入酚氯仿抽提,可以减少蛋白污染,不过RNA有损失
12楼2011-05-17 13:56:33
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muzihai

银虫 (正式写手)

是离心之后取上清再加酚氯仿吗?是的话,加多少?希望能提供一个详细的步骤,非常感谢
没有过不去的事情,只有过不去的心情!
13楼2011-05-17 19:17:06
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muzihai

银虫 (正式写手)

我一般都用500伏电压,80ma,通常都跑不到二十分钟就停了,但是缓冲液没换新的,等明天再试试
没有过不去的事情,只有过不去的心情!
14楼2011-05-17 19:20:34
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wkl1984

金虫 (小有名气)

★ ★ ★ ★ ★
西瓜(金币+5): Good 2011-05-18 11:35:28
引用回帖:
Originally posted by muzihai at 2011-05-17 19:17:06:
是离心之后取上清再加酚氯仿吗?是的话,加多少?希望能提供一个详细的步骤,非常感谢

取加入氯仿离心后的上清,加入等体积的酚氯仿,混匀,离心,取上清,加入等体积的异丙醇和0.1体积的乙酸钠(pH,5.2,用无RNA酶的谁配制),不过防止Rna降解,需要在冰上操作
15楼2011-05-17 19:38:51
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muzihai

银虫 (正式写手)

好的,非常感谢,可惜我还没学会怎么送金币要不然送你几个金币,呵呵
没有过不去的事情,只有过不去的心情!
16楼2011-05-17 19:49:04
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muzihai

银虫 (正式写手)

请教楼上的酚氯仿的配方,非常感谢
没有过不去的事情,只有过不去的心情!
17楼2011-05-18 10:25:38
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wkl1984

金虫 (小有名气)

★ ★
西瓜(金币+2): 热心 2011-05-18 18:20:46
引用回帖:
Originally posted by muzihai at 2011-05-18 10:25:38:
请教楼上的酚氯仿的配方,非常感谢

是按照体积比配制,酚:氯仿=24:1,注意不要和提取DNA的药品混用,防治被污染,你试试看效果怎样
18楼2011-05-18 14:52:01
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muzihai

银虫 (正式写手)

好的我先试试效果
没有过不去的事情,只有过不去的心情!
19楼2011-05-18 15:17:51
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wkl1984

金虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by wkl1984 at 2011-05-18 14:52:01:
是按照体积比配制,酚:氯仿=24:1,注意不要和提取DNA的药品混用,防治被污染,你试试看效果怎样

不好意思,是我写错了,应该是1:1,比较好
20楼2011-05-18 21:19:10
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