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roomofxw

木虫 (正式写手)

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引用回帖:

Originally posted by 475502411 at 2011-04-26 22:24:32:
1.平板上没长菌落，不知道是自连还是没连接上
2.我想先转到DH5a中，然后高拷贝提取质粒后，再转到BL21，因为我怕直接转BL21因连接的质粒少，不好转
3.目的基因产生的蛋白对大肠没有任何毒性
目前就卡在连接 ...

自连也会长菌落的，实验大体没有问题
怀疑是连接的话，那就设计实验，验证连接吧
或者找其他人，替你做一次

11楼2011-04-26 22:40:28

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zhangyonghu

木虫 (小有名气)

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【答案】应助回帖

475502411(金币+4): 2011-05-01 10:25:55

你看看是不是片段太大啊/?
还是你的酶不是很适合啊？

12楼2011-04-26 22:42:30

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475502411

铜虫 (著名写手)

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引用回帖:

Originally posted by zhangyonghu at 2011-04-26 22:42:30:
你看看是不是片段太大啊/?
还是你的酶不是很适合啊？

目的基因648bp
载体是PET-41a，酶切后是4010bp左右
酶切位点是NdeI和ECoRI
用的是T4连接酶，新买的

可以朝九晚五，也能浪迹天涯

13楼2011-04-26 22:49:56

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