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roomofxw

木虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by 475502411 at 2011-04-26 22:24:32:
1.平板上没长菌落,不知道是自连还是没连接上
2.我想先转到DH5a中,然后高拷贝提取质粒后,再转到BL21,因为我怕直接转BL21因连接的质粒少,不好转
3.目的基因产生的蛋白对大肠没有任何毒性
目前就卡在连接 ...

自连也会长菌落的,实验大体没有问题
怀疑是连接的话,那就设计实验,验证连接吧
或者找其他人,替你做一次
11楼2011-04-26 22:40:28
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zhangyonghu

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

475502411(金币+4): 2011-05-01 10:25:55
你看看是不是片段太大啊/?
还是你的酶不是很适合啊 ?
12楼2011-04-26 22:42:30
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475502411

铜虫 (著名写手)

引用回帖:
Originally posted by zhangyonghu at 2011-04-26 22:42:30:
你看看是不是片段太大啊/?
还是你的酶不是很适合啊 ?

目的基因648bp
载体是PET-41a,酶切后是4010bp左右
酶切位点是NdeI和ECoRI
用的是T4连接酶,新买的
可以朝九晚五,也能浪迹天涯
13楼2011-04-26 22:49:56
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