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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】请问各位，如何研究转化后质粒在宿主体内的稳定性？
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)
★
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Originally posted by nancyyazi at 2011-04-10 12:51:28:
我把菌液在4度放了几天，再划线质粒保存率明显小了，就是绿色的相对少了，更何况你平板放了一个月，不知道再活化之后会不会好些？

4度保存的话，划在板上比菌液保存得好多了。菌液直接放4度不算是有效的保存方法呢。
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11楼2011-04-10 18:44:23
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郝钊

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by nancyyazi at 2011-04-10 12:51:28:
我把菌液在4度放了几天，再划线质粒保存率明显小了，就是绿色的相对少了，更何况你平板放了一个月，不知道再活化之后会不会好些？

刚转化完的时候全是绿色的，后来再怎么划线总是会出现一些不绿的。分子生物学知识匮乏，真是搞不懂到底是什么原因。
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12楼2011-04-11 15:24:15
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bkdcj

金虫 (正式写手)

甘油浓度不能太高

★ ★ ★
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西瓜(金币+2): 鼓励交流 2011-04-19 14:03:18
我一般使用8%的甘油保存菌种，太高浓度的甘油质粒容易丢失。
方法是先配置80%的甘油，然后按甘油：菌液=1:9的比例保存。这样做效果还可以，楼主可以一试
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共同进步
13楼2011-04-11 15:45:48
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yesucao

木虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★ ★
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西瓜(金币+4): good 2011-04-19 14:02:50
引用回帖:
Originally posted by nancyyazi at 2011-04-07 16:31:06:
怎样算做50代？平板划线还是直接反复摇菌？

过夜活化菌株，按0.1%接种无抗生素LB培养基，30℃，振荡培养5h，再以0.1%接种无抗生素的LB培养基，按上述相同条件下培养，连续重复培养50h，最后一次培养液涂布LB平板，随机挑取300个转化子转入抗生素平板，以抗性菌株所占百分比计算工程菌的遗传稳定性。
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14楼2011-04-19 08:54:19
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冰风颤木

金虫 (正式写手)
★
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引用回帖:
14楼: Originally posted by yesucao at 2011-04-19 08:54:19
过夜活化菌株，按0.1%接种无抗生素LB培养基，30℃，振荡培养5h，再以0.1%接种无抗生素的LB培养基，按上述相同条件下培养，连续重复培养50h，最后一次培养液涂布LB平板，随机挑取300个转化子转入抗生素平板，以抗性 ...

你好 如果是我做其他菌种 比如DE3宿主菌中质粒的稳定性 也是这么做的吗 谢谢啊
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船到桥头自然直
15楼2013-12-25 10:13:13
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wen问

新虫 (初入文坛)
★
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引用回帖:
14楼: Originally posted by yesucao at 2011-04-19 08:54:19
过夜活化菌株，按0.1%接种无抗生素LB培养基，30℃，振荡培养5h，再以0.1%接种无抗生素的LB培养基，按上述相同条件下培养，连续重复培养50h，最后一次培养液涂布LB平板，随机挑取300个转化子转入抗生素平板，以抗性 ...

想问一下，每一次摇菌后涂布，涂布平板上有一部分已经失去了GFP，那怎么随机挑取单克隆？
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16楼2016-03-07 08:54:44
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