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【求助】换色谱柱的话，流动相条件需要考察几个？已有2人参与
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在做方法验证时对一些问题不太很清楚，指导原则上也是模棱两可，在此和大家讨论一下，请大家多指点，谢谢！ 1、耐用性：有没有规定具体要做几种色谱条件，还是从流速、柱温、比例、pH等条件中随便选几个条件就可以了。 换色谱柱的话，流动相条件需要考察几个？换几根柱子？ 采用什么样品做？（供试品溶液or系统适用性溶液or others？） 如何评价耐用性结果？（分离度是否合格？杂质种类有无变化？杂质含量有无变化？如果要考察杂质含量的话，是不是也要按外标法或自身对照来做，工作量会不会太大了） 2、LOD、LOQ采用什么样品做？对照品or供试品？ 3、回收率：加样回收率能否向空白中加80%、100%、120%的已知纯度的原料药来做？对照品太贵了。 4、中控液相方法验证着重于什么？因为中控方法主要用归一化定量，对于方法的线性、准确度是否有必要验证？ 请大家各抒己见！ |
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小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
jiangchunyong(金币+1): 谢谢！ 2011-04-07 15:17:29
qinhy(金币+3): 鼓励回帖~~再EPI滴标准米有颁布之前暂不发EPI，等标准颁发后再申请吧~~(*^__^*) 嘻嘻…… 2011-04-07 16:26:29
qinhy(EPI+1): 补上EPI~~~ 2011-04-07 20:14:45
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qinhy(EPI+1): 补上EPI~~~ 2011-04-07 20:14:45
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第一，关于耐用性： 1.中国药典附录没有规定具体要做几种色谱条件，一般选取影响测定的典型条件考察就行了，比如选取流速，柱温，流动相比例，检测波长，不同柱子，溶液稳定性考察； 2.如果为酸碱性流动相还得考察PH值； 3.如果为梯度还得考察流动相变化的快慢； 4.如果为ELSD检测器，还得考察飘移管温度； 5考察色谱柱的话，换三根不同品牌的柱子就可以，流动相条件不需要再考察； 6.做耐用性的溶液最好重新制备一份溶液，一份溶液具有可比性； 7.中药的耐用性一般考察含量差别如何（计算RSD），分离度还可以就行，化药也应该考虑杂质得情况。 第二，回收率:最好添加对照品（三个梯度80%，100%，120%，每个梯度平行做三份，共九份样品），否则无法考察方法的准确性。 第三，中控液相方法至少应该做一下线性，因为超出线性范围可能就不是线性了，如果还是按照线性计算的话，结果的误差比较大。 [ Last edited by 中药2000 on 2011-4-7 at 14:22 ] |
2楼2011-04-07 14:17:54
痴夷子皮
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小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
中药2000(金币+2, EPI+1): 很赞同。 2011-04-08 11:16:23
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我也说几句吧。 1、耐用性最主要考察的是仪器系统的适用性。也就是说，在特定的分析方法（流速、柱温、比例、pH等项下），需考察理论板数、分离度、重复性和拖尾因子等四个指标。 理论塔板数即柱效，若药典早有标准，符合即可，若无，一般为待测组分或内标物质的理论板数； 分离度需大于1.5，以评价待测组分与相邻共存物或难分离物质之间的分离程度，衡量色谱系统效能； 重现性，考察连续5次（至少）进样后，色谱系统响应值的重复性； 拖尾因子，用于评价色谱峰的对称性。 当然，分析方法对以上考察存在较大影响。所以，若已有特定的分析方法是最好的了，若无，则只能从单一的一根色谱柱开始，调试流动相、流速、梯度、缓冲液、pH等。达到较好的效果再考察该条件下，不同色谱柱对其影响。 不一定要用外标法来做，外标法工作量真的不少，可以用百分比发粗略估算，等差不多了，再用外标法验证。 2、LOD、LOQ一般采用对照做，若对照量不太多，也可以用样品做，影响不大。 3、回收率，楼上说得差不多了。 |
3楼2011-04-07 21:29:22