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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 【求助/交流】有关免疫沉淀电泳的的操作
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396101466

金虫 (正式写手)

一段遗失的美好

[交流] 【求助/交流】有关免疫沉淀电泳的的操作 已有5人参与

最近看了一篇文章，做了免疫沉淀分析，并作了电泳，但是不清楚电泳中的的成分是沉淀还是上清，想问各位高人，免疫沉淀电泳的具体操作是怎么样的！
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1楼 2011-03-23 09:18:56
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yabxxh

木虫 (正式写手)
你这个太笼统了，说的细一点可能大家能帮得上
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2楼2011-03-23 11:05:22
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396101466

金虫 (正式写手)

一段遗失的美好
★ ★ ★
silicare(金币+3): 很好，鼓励交流 2011-04-25 18:23:23
引用回帖:
Originally posted by yabxxh at 2011-03-23 11:05:22:
你这个太笼统了，说的细一点可能大家能帮得上

我只想解释两个图，图的说明是Fig. 5. Immunoprecipitation using the D1 (A) and A3 (B) Fab fragments and cow's milk samples. The Fab fragments were immobilised on protein L beads and then incubated with themilk samples without orwith heat treatment (0,15, 30 or 60 min at 95°C). After washing steps, the samples were analysed on a 15% SDS-PAGE gel and stained with silver. The boxes indicate the protein bands that were cut out for MS-analysis. Arrows indicate the Fab fragments. Ctr=protein L beads without the immobilized Fab incubated with 0′ (1) and 60′ (2) heated BLG sample. As a control, 1 µg of native BLG (Sigma) and D1/A3 Fab were used.

其操作内容是： Pasteurized, skimmed cow's milk was centrifuged (20 000×g, 2 min, 4 °C) and the supernatant
was diluted 1:4 in PBS and used for immunoprecipitation. In the immunoprecipitation assay, both heat-treated (15, 30,60 min at 95 °C) and native cow's milk samples were used. The BLG-specific Fab fragments D1 and A3 were immobilized onto protein L beads (CBind™L, Fluka) according to the manufacturer's instructions (100-150 µg protein/25 µl beads). Then the milk samples were incubated with protein L-Fab beads for 1 h at room temperature. After the washing step with PBS-0.05% Tween 20, elution was performed by adding first 25 µl and then 50 µl of 0.1 M glycine-HCl (pH 2). The eluted samples were separated on a 15% SDS-PAGE gel
and stained with silver.
我想问的是图中的条带怎么解释呀？谢谢啦！
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人生的三大悲剧：不知道选择，不坚持选择，不断选择！
3楼2011-03-23 15:22:59
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350784478

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
有没有免疫沉淀的操作步骤，我最近也要做。在网上也找了很久，但是具体操作也不一样，也不知道谁是对的。
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朝为田舍郎，暮登天子堂。将相本无种，男儿当自强。
4楼2011-04-25 17:52:36
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ujsyangyong

铁杆木虫 (著名写手)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
lstt09nk(金币+2): 感谢参与 2011-04-26 22:02:41
电泳的样品是最后的沉淀用上样缓冲液煮出来的样品，免疫沉淀的原理就是证明两个蛋白的结合，如用A的抗体加入样品中孵育，A就会和抗A抗体结合，再用珠子去结合抗体的Fc段，这样就会形成珠子-抗A-A复合物，沉淀下来，上样缓冲液煮过上样，以抗B抗体进行WesternBlot检测，如能测到条带，则证明AB是结合在一起的
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实验，实验，还是实验！
5楼2011-04-25 22:10:28
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396101466

金虫 (正式写手)

一段遗失的美好
引用回帖:
Originally posted by ujsyangyong at 2011-04-25 22:10:28:
电泳的样品是最后的沉淀用上样缓冲液煮出来的样品，免疫沉淀的原理就是证明两个蛋白的结合，如用A的抗体加入样品中孵育，A就会和抗A抗体结合，再用珠子去结合抗体的Fc段，这样就会形成珠子-抗A-A复合物，沉淀下来 ...

谢谢啦！
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6楼2011-04-27 19:26:21
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xiayongxiu

金虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
1014536楼: Originally posted by 396101466 at 2011-03-23 15:22:59
我只想解释两个图，图的说明是Fig. 5. Immunoprecipitation using the D1 (A) and A3 (B) Fab fragments and cow's milk samples. The Fab fragments were immobilised on protein L beads and then incubated wit ...

请问你这是一篇什么文献啊？介意把文献名称发出来大家看看不？
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一切都要靠自己努力
7楼2013-01-26 21:31:02
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