| 查看: 999 | 回复: 5 | ||||
| 当前主题已经存档。 | ||||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||||
humolon金虫 (正式写手)
|
[交流]
一个不错的蛋白表达指南
|
|||
|
以一个蛋白的表达实验为例，告诉大家从拿到一个课题开始，如何一步步地分析蛋白、设计实验手段、分析实验结果、提出下一步实验计划给我们很多启示。 在每一步都提出好几个问题，引导你学会如何分析问题，这样的课件确实非常棒！ 总结一下：对于一个蛋白来说 第一步：了解该蛋白的基本信息，获得序列信息、了解Domain的构成情况。工具：Entrez、Interpro、CDD（补充：UniProt、GeneCards） 很有意思的是，在这里作者给出的判断题是This project is too complicated. Let's abandon it.而答案是：Right - a pesimist is an optimist with a lot of experience!! 第二步：对蛋白序列进行生物信息学分析。 1：是否含有稀有密码子。工具：Rare Codon Caltor（补充：GCUA） 2：是否有二硫键。工具：PredictProtein 3：是否含有信号肽。工具：SignalP, PsortII 4：磷酸化和糖基化位点。工具：Netphos, YinOYang , NetNGlyc, NetOGlyc 第三步：构建载体在不同的菌株中表达，同时尝试不同的诱导条件，包括：诱导时OD值、诱导温度、IPTG浓度、诱导时间。SDS－PAGE电泳及Western－Blot分析表达结果。同时进行细菌生长曲线作图，观察目的蛋白对宿主菌是否有毒害作用。 虽然最终的表达结果仍然不令人满意，但是通过这样的分析过程确实学到很多。 链接地址：http://teachline.ls.huji.ac.il/72682/RTS/HP.html |
回复此楼» 收录本帖的淘帖专辑推荐
 药品研发 |
» 猜你喜欢
焦虑
已经有13人回复
-
一志愿985，本科211，0817化学工程与技术319求调剂
已经有8人回复
-
0817 化学工程 299分求调剂 有科研经历 有二区文章
已经有9人回复
-
346求调剂[0856]
已经有5人回复
-
285化工学硕求调剂（081700）
已经有11人回复
-
267一志愿南京工业大学0817化工求调剂
已经有9人回复
-
274求调剂
已经有6人回复
-
求材料调剂
已经有10人回复
-
本科郑州大学物理学院，一志愿华科070200学硕，346求调剂
已经有4人回复
-
国自科面上基金字体
已经有8人回复
6楼2006-08-28 20:05:06
2楼2006-08-21 09:30:24
ymj002
木虫 (小有名气)
- BioEPI: 1
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 2730.4
- 帖子: 204
- 在线: 14.9小时
- 虫号: 53819
- 注册: 2004-09-19
- 性别: GG
- 专业: 生物物理、生物化学与分子
3楼2006-08-21 14:29:05
