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DNA分子克隆与PCR扩增DNA的区别？
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| DNA分子克隆与PCR扩增DNA的区别？ |
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cxfans(金币+2, 博学EPI+1): 2011-04-03 13:08:57
cxfans(金币+3): 2011-04-03 13:09:05
cxfans(金币+3): 2011-04-03 13:09:05
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DNA分子克隆技术（也称基因克隆技术） ：在体外将DNA分子片段与载体DNA片段连接，转入细胞获得大量拷贝的过程中DNA分子克隆(或基因克隆)。其基本步骤包括：制备目的基因→将目的基因与载体用限制性内切酶切割和连接，制成DNA重组→导入宿主细胞→筛选、鉴定→扩增和表达。载体（vecors）在细胞内自我复制，并带动重组的分子片段共同增殖，从而产生大量的DNA分子片段。主要目的是获得某一基因或NDA片段的大量拷贝，有了这些与亲本分子完全相同的分子克隆，就可以深入分析基因的结构与功能，随着引入的DNA片段不同，有两种DNA库，一种是基因组文库（genomic library）,另一种是cDNA库。 PCR是聚合酶链反应的英文缩写。该反应是根据DNA变性，复性原理设计的。反应系统中包括含目的基因的微量样品，耐热的DNA聚合酶，4种dNTP（脱氧核苷酸）以及两种过量的引物。引物一般长20-30bp（可以用人工合成）。该反应分三步进行： a.DNA模板（目的基因和引物）高温度变性（95°C） 使之解链。 b.降温复性（40°C-60°C），使目的基因与引物杂交。 c.在70°C-75°C的温度下，DNA聚合酶进行酶促聚合反应，使目的基因DNA序列在3’位置上逐渐延伸。新合成的引物延伸链又可以作为下一步反应的模板，如此反复循环进行，按照2^n的指数扩增，短时间内可获得大量的DNA目的基因。 |
2楼2011-03-13 10:21:28
3楼2011-03-13 10:39:53
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本帖内容被屏蔽 |
4楼2011-03-13 10:43:58
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本帖内容被屏蔽 |
5楼2011-03-13 10:44:28
6楼2011-03-13 10:48:50
7楼2012-03-19 13:40:08
8楼2012-05-03 09:30:50
