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wjg_1979

木虫 (小有名气)

[交流] 简并引物溶解

请问简并引物怎样加水溶解呀，是以那个来算的，如：GCXAAYAAYAGYGGXZCC
X=A，T，C，G；Y=T，C；Z=A，G
E-MAIL：wjg_1979@163.com
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1楼 2006-07-22 14:02:01
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Tibetboy

铁虫 (初入文坛)
★ ★
zhaoyusnow(金币+2):谢谢参与。欢迎常来。
不知道你的引物是怎么合成的，A=312, C=288,G=328,T=303
一般引物分子量近似算法是　
DNA分子量＝３２４.５＊碱基数．多义碱基只是对原碱基的修饰，分子量可用３２４.５这个平均值来算．
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2楼2006-07-25 00:51:45
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wjg_1979

木虫 (小有名气)
我的意思是，在简并的碱基中以那个碱基来计算，还是都算上。
如上面的可换成：GGGAACAACAGCGGGCAGCC，GGCAACAACAGCGGCCAGCC等，但是应以那个来加呢
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3楼2006-07-25 10:14:33
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Tibetboy

铁虫 (初入文坛)
多义的碱基　　以平均分子量的标准来算吧　DNA分子量＝３２４.５＊碱基数，
这种配置应该能满足实验要求吧，本身合成的引物都含有很多碎片的，呵呵
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4楼2006-07-25 11:31:32
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Tibetboy

铁虫 (初入文坛)
简并的在里面也只是一个碱基，你怎么可能都算上了，那你的分子量不是偏差很大了？
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5楼2006-07-25 11:42:02
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suozl

★ ★
wjg_1979(金币+1):感谢认真回答
zhaoyusnow(金币+1):谢谢参与。欢迎常来。
简并引物溶解
GCXAAYAAYAGYGGXZCC
X=A，T，C，G；Y=T，C；Z=A，G
建议你把各种可能的排列组合都写出来，算出每一条具体引物的分子量，找出分子量的最大值、最小值和中间值， 合成引物前要告诉公司，合成 2 O.D.， 分4管，每管0.5  O.D.。 然后，按照常规方法配制引物工作液，即取其中3管，分别按分子量的最大值、最小值和中间值稀释出工作液来，做好标记，不要乱了。用这3种配制液常规方法各做各的PCR，判断结果的回馈信息，祝你成功。
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6楼2006-07-25 15:02:22
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wjg_1979

木虫 (小有名气)

请问这样行吗?

简并引物溶解
GCXAAYAAYAGYGGXZCC
X=A，T，C，G；Y=T，C；Z=A，G
建议你把各种可能的排列组合都写出来，算出每一条具体引物的分子量，找出分子量的最大值、最小值和中间值， 合成引物前要告诉公司，合成 2 O.D.， 分4管，每管0.5  O.D.。 然后，按照常规方法配制引物工作液，即取其中3管，分别按分子量的最大值、最小值和中间值稀释出工作液来，做好标记，不要乱了。用这3种配制液常规方法各做各的PCR，判断结果的回馈信息，祝你成功。

我现在是这样做的:合成后公司给了一个分子量,我就用这个分子量来算了.不知这样行不行?谢谢!suozl  请回!另,请问你是象你说的这样做的吗?
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7楼2006-07-25 20:07:16
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wjg_1979

木虫 (小有名气)

问题已解决！

问题已解决！
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8楼2006-07-28 08:22:20
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