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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » 【求助】BSA的荧光
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a362544961

新虫 (小有名气)

[交流] 【求助】BSA的荧光

（BSA的荧光）我配的一瓶BSA,为什么有时候测了一个结果之后，过一个小时再测，发现结果就不一样了，这个是什么原因啊，指导一下啊，
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1楼 2011-01-13 10:07:50
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a362544961

新虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by a362544961 at 2011-01-13 10:07:50:
（BSA的荧光）我配的一瓶BSA,为什么有时候测了一个结果之后，过一个小时再测，发现结果就不一样了，这个是什么原因啊，指导一下啊，

还有就是DMF对BSA荧光有没有影响啊，因为我测的BSA数据都不一样，加了DMF后也不好比较，有做过类似的说一下啊，谢谢啦，
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2楼2011-01-13 10:23:37
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fever366

木虫 (正式写手)
★
a362544961(金币+1):谢谢参与
荧光貌似本身重现性就不好，至于DMF不懂
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3楼2011-01-13 14:46:45
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rxh75

银虫 (小有名气)
★
a362544961(金币+1):谢谢参与
荧光测定是允许有正负5%的误差存在的，不知道你的“结果就不一样了”是不是在这个范围内，如果不在，那有这样的可能就是BSA在一小时内保存不当而影响的（不知道你是否确定保存没问题）。还有你说的是“有时候”那看了是稳定的时候还是较多的啦。那么这少有的不稳定就可以弃之不用了吧。
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4楼2011-01-13 16:09:01
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rxh75

银虫 (小有名气)
★
a362544961(金币+1):谢谢参与
引用回帖:
Originally posted by a362544961 at 2011-01-13 10:23:37:

还有就是DMF对BSA荧光有没有影响啊，因为我测的BSA数据都不一样，加了DMF后也不好比较，有做过类似的说一下啊，谢谢啦，

BSA数据不一样是什么意思啊？同一浓度的一直在变吗？那确实不能比较。要想办法
确定一定浓度的BSA的荧光强度，然后跟相同浓度下有DMF存在的荧光强度，就能确定DMF是否对其的荧光强度有影响了吧。DMF一般是作为溶剂用的，你的牛血清蛋白是用什么溶剂配制的啊？水吗？
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5楼2011-01-13 16:19:40
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opq691

荣誉版主 (知名作家)
★
a362544961(金币+1):谢谢参与
看你的数据变化有多大 ，还有就是蛋白容易折叠或者去折叠 露出荧光基团或者包起来，也可能你的蛋白变质了 配置新的试试
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6楼2011-01-13 20:53:24
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a362544961

新虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by rxh75 at 2011-01-13 16:09:01:
荧光测定是允许有正负5%的误差存在的，不知道你的“结果就不一样了”是不是在这个范围内，如果不在，那有这样的可能就是BSA在一小时内保存不当而影响的（不知道你是否确定保存没问题）。还有你说的是“有时候”那 ...

我测的最大有9000以上的，最小有6000多的，误差应该超过5%了，我保存就是放冰箱啊，但是测的数据老是不一样，而且现在温度这么低，室温也就几度，跟冰箱也差不多了，应该保存没什么问题，
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7楼2011-01-14 09:09:49
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a362544961

新虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by rxh75 at 2011-01-13 16:19:40:

BSA数据不一样是什么意思啊？同一浓度的一直在变吗？那确实不能比较。要想办法
确定一定浓度的BSA的荧光强度，然后跟相同浓度下有DMF存在的荧光强度，就能确定DMF是否对其的荧光强度有影响了吧。DMF一般是作为 ...

我一直都是用一个浓度的，然后加DMF也是在这个浓度加的，我一次测BSA到6800，后来就测了其他的样，回过头我测了下加DMF的，到7140了，然后我有把之前那个BSA又测了一遍，7400了，BSA两次测量间隔一个小时吧，所以我也不好确认DMF有没有影响，我DMF加的很少，50微升，BSA是2.5ml，是用Tris-Hcl配的，PH7.0，
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8楼2011-01-14 09:13:39
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a362544961

新虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by opq691 at 2011-01-13 20:53:24:
看你的数据变化有多大 ，还有就是蛋白容易折叠或者去折叠 露出荧光基团或者包起来，也可能你的蛋白变质了 配置新的试试

恩， 谢谢了，我配了好几瓶了，再多配点试试
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9楼2011-01-14 09:14:57
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rxh75

银虫 (小有名气)
★
opq691(金币+1):O(∩_∩)O谢谢 2011-01-14 20:02:42
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Originally posted by a362544961 at 2011-01-14 09:13:39:

我一直都是用一个浓度的，然后加DMF也是在这个浓度加的，我一次测BSA到6800，后来就测了其他的样，回过头我测了下加DMF的，到7140了，然后我有把之前那个BSA又测了一遍，7400了，BSA两次测量间隔一个小时吧，所 ...

要不你测一下其他物质比如水的荧光看稳定不，变化大不，或者罗丹明的，它的荧光强度还大些，要是其他物质稳定，那就是BSA或者其他的原因了。我也是用荧光测定试卤灵的，现在实验有些地方做的不严密，哎，补实验比重新做都费劲，快该回家了，老师让写的一个小文章还没写好，愁啊！
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10楼2011-01-14 10:11:21
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a362544961

新虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by rxh75 at 2011-01-14 10:11:21:

要不你测一下其他物质比如水的荧光看稳定不，变化大不，或者罗丹明的，它的荧光强度还大些，要是其他物质稳定，那就是BSA或者其他的原因了。我也是用荧光测定试卤灵的，现在实验有些地方做的不严密，哎，补实验 ...

我们这台荧光刚刚请工程师过来调试了的，我就这样做吧，反正我要的是猝灭的趋势，作图线性好就可以，我做这些性质实验是想毕业论文有东西写，接下来还想做下三维荧光和三维偏振荧光，都没做过，不知道做出来结果怎么样，明年就毕业了，现在也愁啊，
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11楼2011-01-14 11:05:53
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乔爽

铜虫 (小有名气)
★
a362544961(金币+1):谢谢参与
你的数值是不是太大了啊？不知道你用的是那家仪器做的。荧光的重复性不太好，你可以测一下纯水的荧光，或是测一下溶剂的荧光，看看你本身仪器的稳定性啊。我一般侧荧光很少超过6000的，9000快到仪器的极限了，指定误差大啊，你调一下狭缝啊。荧光一般很难重复的，你算一下你的比值，如果你的样品荧光比值小于仪器本身的误差你就没办法了啊。BSA荧光其实比较稳定啊
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12楼2011-01-15 09:47:58
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a362544961

新虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 乔爽 at 2011-01-15 09:47:58:
你的数值是不是太大了啊？不知道你用的是那家仪器做的。荧光的重复性不太好，你可以测一下纯水的荧光，或是测一下溶剂的荧光，看看你本身仪器的稳定性啊。我一般侧荧光很少超过6000的，9000快到仪器的极限了，指定 ...

是日立F-4600，我的浓度是10 -5M的,因为是刚刚调试过的仪器，我觉得不会是仪器的问题，我想了有可能是我没预热，那个工程师说做荧光前要开着灯预热半小时，再就是不知道温度有没有影响，因为时间长了荧光仪里面的温度就起来了，还有想问一下，你知不知道三维荧光结果怎么看啊，我把间隔调到10nm，结果里面就全是10的整数倍，比如270/340，280/350等等，然后我又不想把间隔调小，调小了做一个样的时间太长了，
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13楼2011-01-15 10:36:13
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乔爽

铜虫 (小有名气)
★
a362544961(金币+1):谢谢参与
引用回帖:
Originally posted by a362544961 at 2011-01-15 10:36:13:

是日立F-4600，我的浓度是10 -5M的,因为是刚刚调试过的仪器，我觉得不会是仪器的问题，我想了有可能是我没预热，那个工程师说做荧光前要开着灯预热半小时，再就是不知道温度有没有影响，因为时间长了荧光仪里面 ...

10-5浓度太大了吧，我一般做10-7的。机器必须预热啊，要不荧光不稳定啊，一。三维荧光我不清楚。呵呵。不过说实话，荧光仪器就算刚调过你也得做一下他的稳定性。厂商是不会说他机器有问题的。但实验要结果说的算啊。
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14楼2011-01-15 10:46:52
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hao-

铁杆木虫 (正式写手)
★
a362544961(金币+1): 谢谢参与
过来学习一下。
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15楼2015-08-07 14:18:17
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