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【摘要编号】31072063/c170108
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book2005593
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wg423(金币+4, 基金HEPI+1): 代发 2011-01-20 10:52:52
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项目编号 31072063 项目名称 黄曲霉毒素解毒酶基因的克隆及外源分泌表达 项目类型 面上项目 申报学科1 饲料学(C170108) 申报学科2 饲料学(C170105) 研究性质 应用基础研究 资助金额 35.00万元 开始日期 2011年1月1日 完成日期 2013年12月31日 项目摘要 黄曲霉毒素（AFT）对人和动物危害巨大。课题组在已完成国家自然科学基金项目中分离到一株粘细菌，其分泌的胞外酶对AFTB1的降解率达78%以上。分离纯化解毒酶蛋白经电泳显示分子量约为44kDa。本次申请拟将纯化后的粘细菌黄曲霉毒素解毒酶活性蛋白应用胰蛋白酶原位降解得到肽段混合物；用高效液相色谱法分离肽段，并采用Edman降解法测定3个10-15个氨基酸残基组成的特征肽段氨基酸序列；根据特征肽段氨基酸序列设计寡核苷酸引物，以粘细菌基因组DNA为模板进行end to end PCR扩增；通过对PCR产物序列分析得到黄曲霉毒素解毒酶全长基因，并构建解毒酶基因异源表达的毕赤酵母重组菌株。将重组菌用于高密度发酵培养，进行解毒酶基因表达及重组菌产酶分析。通过本研究将发现黄曲霉毒素解毒酶基因和得到自主知识产权的毕赤酵母重组菌，为黄曲霉毒素的降解提供理论依据，也将为此酶作为饲料添加剂的进一步应用奠定基础。 获资助单位 中国农业大学(项目负责人) |
2楼2011-01-12 10:07:45