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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】亚细胞定位
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zhhuijun

木虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】亚细胞定位 已有10人参与

各位朋友：对于已知基因如何进行亚细胞定位．我应如何做．谢谢．
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1楼 2011-01-11 21:48:02
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ann123_

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
1 用镊子撕取洋葱里表皮 1cm2小块放在MS培养基上，28℃预培养5h。
2 侵染液制备
将菌液加入含抗生素的LB培养基，培养过夜，5000离心5分钟，收集菌体，LB重悬浮，分光光度计测定菌液浓度，其浓度调至OD＝1左右。
3 浸染
将上述菌液倒入到预培养培养基中，泡 30min，期间摇动数次。倒去菌液，将洋葱表皮置于灭菌滤纸上吸干表面菌液。
接入共培养培养基（MS培养基加AS），28℃暗培养2天观察。
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11楼2015-08-24 16:38:47
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yusuya

木虫 (小有名气)

有预测亚细胞结构的在线网站

★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
记得是能根据基因预测细菌蛋白亚细胞结构的，你可以找找看，我现在一时也想不起来了!
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2楼2011-01-11 22:07:12
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
免疫荧光或者原位杂交做激光共聚焦
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3楼2011-01-11 22:50:15
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翱宇

禁虫 (正式写手)

将军
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
reasonspare(金币+2):谢谢分享。 2011-01-12 08:01:54
首先将你的基因与GFP基因融合，构建到一起，我们实验室用pRTL2质粒，测序正确后提取质粒，转化农杆菌，注射烟草，以激光共聚焦显微镜观察即可。
另外也可以将你的质粒转BY2细胞，或者原生质体的瞬时转染，再者用基因枪打洋葱表皮，在荧光显微镜下观察就行了。
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4楼2011-01-11 23:01:58
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