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smmuww1981金虫 (初入文坛)
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[交流]
荧光定量PCR基因表达的实验数据应该如何处理、分析
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总的来说，有三个层次的校正是必须要做。 首先，参比信号校正。试剂中必须包含固定浓度的ROX，这样的话荧光信号随反应体积、所在孔位置、所用试管特别是管盖等的差异都将被扣除，使得数据真正反映PCR进程。ROX校正将极大地改进定量的精确度，比如重复管之间的数据重现性。 其次，内对照校正。实验中加入样品都是以体积为单位的，但是同样体积的不同样品很可能来自不同数目的细胞或基因组，所以将实验结果校正到每个基因组或每个细胞的含量是必要的。方法是在测定目的基因如IL-2的同时，测定一个内对照基因如18S RNA，然后IL-2/18S。内对照校正使不同样品的实验数据可以相互比较，也就是进行下一步的基准校正。 第三，计算相对于基准样品(Calibrator Sample)的基因含量。比如研究处理和未处理的、0小时和6小时的、正常和患病的之间的差别，则处理/未处理、6小时/0小时、患病/正常。 |
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