24小时热门版块排行榜    

查看: 2460  |  回复: 18

brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

我爱打老虎

文献杰出贡献

晕死,机子卡了,发了两遍。
The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.
11楼2010-12-30 20:43:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wangdandelia

木虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by kun2199 at 2010-12-30 18:08:25:
好像主要是增加连接体系内的拥挤程度,增加载体和片段的碰撞几率,用过两次,没起到效果,Takala的T4连接酶可以连接平端,我连过3k片段加8k的载体,不加水,10ul小体系,片段亮度要大。

(⊙v⊙)嗯,好的,谢谢哦~
12楼2010-12-30 20:43:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wangdandelia

木虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by brightfuture01 at 2010-12-30 20:40:48:



如果你想过夜连的话可以在16度,如果想更久的话就放在4度。我们一般就在16度过夜,做不出来才考虑长时间4度连接。

外源DNA与载体DNA的摩尔比为10:1,记得是摩尔比哈,不是质量比。这个比例还可以加大。

恩,好的,我也试试,呵呵,非常感谢~!新年快乐!
13楼2010-12-30 20:45:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wangdandelia

木虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by brightfuture01 at 2010-12-30 20:43:21:
晕死,机子卡了,发了两遍。

忘了问了,呵呵,你们加PEG8000吗?
14楼2010-12-30 20:47:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

我爱打老虎

文献杰出贡献

引用回帖:
Originally posted by wangdandelia at 2010-12-30 20:47:35:

忘了问了,呵呵,你们加PEG8000吗?

不加的,呵呵,想加的话你加点吧。这个的作用是亲水,然后增加片段的相对浓度,有利于分子碰撞,增大连上的可能性。
The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.
15楼2010-12-30 20:50:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wangdandelia

木虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by brightfuture01 at 2010-12-30 20:50:34:



不加的,呵呵,想加的话你加点吧。这个的作用是亲水,然后增加片段的相对浓度,有利于分子碰撞,增大连上的可能性。

哦,请问加上PEG之后,会不会影响转化呢?
很多人说加入PEG后也不一定起作用,可能还要提纯。。
16楼2010-12-30 20:52:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

我爱打老虎

文献杰出贡献

引用回帖:
Originally posted by wangdandelia at 2010-12-30 20:52:37:

哦,请问加上PEG之后,会不会影响转化呢?
很多人说加入PEG后也不一定起作用,可能还要提纯。。

高浓度的会对转化造成不利。提纯的话就算了,乙醇沉淀会损失好些DNA的,更何况你这么少的连接产物。

实在相加的话就加不同比例的试试,看看下面这篇文献:

http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/ ... f/nar00367-0201.pdf
The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.
17楼2010-12-30 20:58:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by wangdandelia at 2010-12-30 17:42:20:

请问你用的是哪个公司的mix啊?连接平末端效率怎样?

我用TOYOBO的。效率真的没话说~~没想到一个日系的小公司还挺给力
18楼2010-12-30 21:34:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wangdandelia

木虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2010-12-30 21:34:44:


我用TOYOBO的。效率真的没话说~~没想到一个日系的小公司还挺给力

(⊙o⊙)哦 有机会的话试一试,谢谢哦~呵呵~
19楼2010-12-30 21:48:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 wangdandelia 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 304求调剂 +4 曼殊2266 2026-03-18 4/200 2026-03-20 07:17 by Iveryant
[考研] 279分求调剂 一志愿211 +3 chaojifeixia 2026-03-19 3/150 2026-03-20 05:47 by laoshidan
[考研] 329求调剂 +5 想上学吖吖 2026-03-19 5/250 2026-03-19 23:56 by 23Postgrad
[考研] 296求调剂 +3 www_q 2026-03-18 6/300 2026-03-19 22:28 by zhq0425
[考研] 一志愿 西北大学 ,070300化学学硕,总分287,双非一本,求调剂。 +3 晨昏线与星海 2026-03-19 3/150 2026-03-19 13:36 by houyaoxu
[考研] 一志愿985,本科211,0817化学工程与技术319求调剂 +10 Liwangman 2026-03-15 10/500 2026-03-19 10:25 by 无际的草原
[考研] 330求调剂 +3 小材化本科 2026-03-18 3/150 2026-03-18 21:55 by 无懈可击111
[考研] 311求调剂 +11 冬十三 2026-03-15 12/600 2026-03-18 14:36 by 星空星月
[考研] 材料专硕306英一数二 +10 z1z2z3879 2026-03-16 13/650 2026-03-18 14:20 by 007_lilei
[考研] 331求调剂(0703有机化学 +7 ZY-05 2026-03-13 8/400 2026-03-18 14:13 by 007_lilei
[考研] 0854,计算机类招收调剂 +3 胡辣汤放糖 2026-03-15 6/300 2026-03-18 12:09 by 上岸上岸……..
[考研] 265求调剂 +3 梁梁校校 2026-03-17 3/150 2026-03-18 09:12 by zhukairuo
[考研] 考研求调剂 +3 橘颂. 2026-03-17 4/200 2026-03-17 21:43 by 有只狸奴
[考研] 机械专硕325,寻找调剂院校 +3 y9999 2026-03-15 5/250 2026-03-16 19:58 by y9999
[考研] 304求调剂 +3 曼殊2266 2026-03-14 3/150 2026-03-16 16:39 by houyaoxu
[考研] 277材料科学与工程080500求调剂 +3 自由煎饼果子 2026-03-16 3/150 2026-03-16 14:10 by 运气yunqi
[考研] 326求调剂 +3 mlpqaz03 2026-03-15 3/150 2026-03-16 07:33 by Iveryant
[考研] 22408总分284求调剂 +3 InAspic 2026-03-13 3/150 2026-03-15 11:10 by zhq0425
[考研] 085601材料工程315分求调剂 +3 yang_0104 2026-03-15 3/150 2026-03-15 10:58 by peike
[考研] 288求调剂 +4 奇点0314 2026-03-14 4/200 2026-03-14 23:04 by JourneyLucky
信息提示
请填处理意见