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wangly

金虫 (小有名气)

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[交流] 【求助】UPLC检测对苯二酚

用WATERS公司的UPLC检测对苯二酚结果发现不保留，几个问题需要请教下大家：
我选用的条件是：色谱柱：BEH C18 ，2.1×50mm，1.7um；
                  流动相：甲醇：1%乙酸水溶液=5：95
                                 流速：0.1ml/min;0.25ml/min
   国标选用的方法是常规的C18柱，4.6×250mm，5um
                              流动相：甲醇：1%乙酸水溶液=5：95
                              流速：0.8ml/min  保留时间基本控制在6～7min

   1.  0.25ml/min下的保留时间在0.5min；0.1ml/min下的保留时间约1.2min；以0.1ml/min会不会有点太低，影响检测的准确性；
2.  如果继续增大乙酸在水溶液中的含量最大可以到多少？
3.如果不换柱子还有什么还办法能够让保留时间延长？
多谢！

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1楼 2010-12-29 14:26:47

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新虫 (初入文坛)

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wangly(金币+10):非常感谢！ 2011-01-11 09:51:07

0.1的流速太慢了，UPLC的最佳流速在0.25~0.35之间，你用的是紫外检测器吧，注意下压力，不高的话可以用大点的流速，峰形会漂亮
可以适当提高甲醇的比例，摸条件时，可以先运行一个梯度方法，看看待测物质大致在哪个甲醇比例下出峰，再选用此比例的等度条件做，等度条件重现性好些
长柱子与短柱子在方法上是有一定区别的，
醋酸铵的浓度与柱子有关，具体能加到多少浓度也不好说，我用过的最高浓度是30mmol，你这个浓度貌似有点高，短柱子填料小，容易堵，10mmol就能够起到改善分离度和峰形的作用了

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