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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】蛋白含量测定
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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

我爱打老虎

文献杰出贡献
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Originally posted by henkally at 2010-12-29 11:28:37:



这个问题，我觉得大家搞复杂了。
LZ是测蛋白含量，后续测酶活。没必要进行纯化，去除叶绿素。但叶绿素的吸收峰和BRADFORD（考染法）反应后产物的吸收峰接近，肯定会有影响。所以可以换个蛋白含量测试方法， ...

如何肯定叶绿素不会影响后续的酶活测定呢？
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The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.
11楼2010-12-29 11:32:13
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kong10

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by henkally at 2010-12-29 11:28:37:



这个问题，我觉得大家搞复杂了。
LZ是测蛋白含量，后续测酶活。没必要进行纯化，去除叶绿素。但叶绿素的吸收峰和BRADFORD（考染法）反应后产物的吸收峰接近，肯定会有影响。所以可以换个蛋白含量测试方法， ...

BCA法测的准确度怎么样呢？对了，还想问问您，如果想去除样品里面的糖等物质，什么方法最可取？我也采用过硫酸铵沉淀，但是后面没看到沉淀，这个该怎么解释？灰常感谢
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12楼2010-12-29 11:33:43
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henkally

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13楼2010-12-29 11:35:15
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kong10

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Originally posted by brightfuture01 at 2010-12-29 11:31:05:



，这个柱子的填料是 葡聚糖凝胶G-25。原理是分子筛，一定是要过柱子的。离心啥用也没有。。。。。。

我明白，我的意思是加入葡聚糖的小柱子，再离心，这样做到底能不能去除糖和盐分？刚接触，多体谅，谢谢
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14楼2010-12-29 11:36:39
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kong10

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Originally posted by henkally at 2010-12-29 11:35:15:


叶绿素性质很稳定的，基本没啥反应活性。
依据LZ描述的情况，肯定是植物样品，能测的酶活多半是CAT，SOD，POD，之类，本人做过，不会影响

我做的是蔗糖转化方面的酶，不知道有没有影响
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15楼2010-12-29 11:37:50
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henkally

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16楼2010-12-29 11:38:50
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henkally

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17楼2010-12-29 11:42:37
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kong10

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by henkally at 2010-12-29 11:42:37:



这个酶没做过，你自己试试吧。估计影响不大，不然你提取过程中，叶绿素如果能和它反应的话早反应了。

加你好友了，可以保持联系吗？非常感谢
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18楼2010-12-29 11:45:06
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ws19861025

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Originally posted by brightfuture01 at 2010-12-29 11:31:05:



，这个柱子的填料是 葡聚糖凝胶G-25。原理是分子筛，一定是要过柱子的。离心啥用也没有。。。。。。

赞同，而且离心速度过快是不是会使蛋白失活不好说
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19楼2010-12-29 17:45:21
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