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本文研究了聚乙烯亚胺—胆固醇阳离子聚合物（PEI-Chol）基因载体的性能及其结合中性脂质、聚二乙醇修饰脂质微泡介导的基因传递系统（微泡/PEI-Chol/DNA）的体外细胞基因转染效率。采用用胆固醇甲酰氯与聚乙烯亚胺（Mw1800）通过酰胺化制的PEI-Chol，并运用IR、HNMR和MADI-TOF-MS（基质辅助激光解吸附电离串联飞行时间质谱）对其结构和分子量进行测定，平均相对分子质量约为2000。采用反向挥发法制备DPPC、DSPE-PEG200和全氟丙烷构建的粒径为2~8μm的脂质微泡，并运用自组装技术将PEI-Chol/DNA复合物与微泡融合，构建微泡/PEI-Chol/DNA(bubble/PEI-Chol/DNA)基因转染系统；以pEGFP-CL(enhanced green fiuoresecent protein,增加型绿色荧光蛋白)为报告基因，用凝胶滞留试验观察PEI-Chol的DNA压缩能力，同时在A549和MCF-7的两种细胞中比较以PEI-Chol为核心构建的各种载体系统的细胞毒性、抗血清沉淀作用以及细胞转染效率。结果发现，当N/P比值为4以上时，PEI-Chol能有效压缩DNA;PEI-Chol和构建的微泡系统对A549和MCF-7两种细胞几乎没有毒性；本微泡介导基因转染系统，一方面降低PEI-Chol的毒性，提高抗血清蛋白沉淀作用，另一方面提高其基因转染效果。研究表明新型bubble/PEI-Chol/DNA是一种高效低毒的非病毒载体系统。 |
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