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2004371310

木虫 (著名写手)


[交流] 【求助/交流】重叠延伸

我有一个大约1800bp的基因,想对它中间的一段序列进向改造,如果我想先扩增出两个片段,分别是600bp和1200bp,然后再把这两个片段重叠延伸成一个完整的片段,想请教各位这样做是否可行。听说片段太大的话不好重叠延伸,有没有必要把这个片段分成更多的段数来进行重叠延伸呢?请大家不吝赐教,谢谢!
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Arrennew

铁杆木虫 (正式写手)


2004371310(金币+1):谢谢! 2010-12-13 22:21:14
重叠部分挺重要的,我原来以为长一些好,但结果好像并不是这样,重叠100个碱基的就没做出来,20-25个效果较好,gc高一些,合成时不易突变,退火也容易,不知道这个规律普遍不普遍。
2楼2010-12-13 21:43:44
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rainwander

铁杆木虫 (知名作家)


2004371310(金币+1):谢谢! 2010-12-13 22:21:26
没有必要分成更多的段数来进行重叠延伸

只要你的重叠引物设计的没问题,

就好重叠
3楼2010-12-13 21:58:20
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