| 查看: 1856 | 回复: 4 | |||
[交流]
【求助/交流】氨基酸的纸层析
|
大家谁做过氨基酸的纸层析实验，所用的显色剂是茚三酮的水溶液还是茚三酮的丙酮溶液，另外，有的文献中只用正丁醇：乙酸：水体系就行，但是有的实验书上讲的还要用酸碱两种展开剂，哪个正确点？谁如果做过希望能尽量详细的讲一下啊，万分感谢！ |
回复此楼» 本帖已获得的红花（最新10朵）
jacqueline_geng» 猜你喜欢
宠物寄生虫防治：氟雷拉纳阻断GABA受体，持效12周驱杀跳蚤蜱虫
已经有0人回复
-
为呼吸打开通道：依伐卡托的科学之旅
已经有1人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有189人回复
-
Dordaviprone（ONC201）：小分子药物在中线胶质瘤中的应用
已经有0人回复
-
依喜替康：新型喜树碱衍生物的研究进展
已经有1人回复
-
膀胱癌靶向治疗新选择：厄达替尼作用机制与耐药研究进展
已经有0人回复
-
从水母到实验室：腔肠素的发现历程与生物发光奥秘
已经有1人回复
-
线粒体氧化磷酸化的新靶点：S-Gboxin的发现与研究进展
已经有0人回复
-
PROTAC药物开发选择VHL配体：MDK-7526以87%出口向量占有率成首选
已经有0人回复
-
MCC950：NLRP3炎症小体特异性抑制剂的科研应用与前景
已经有0人回复
-
康替唑胺研发17年：如何解决多重耐药菌感染难题
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 【求助】氨基酸方应，柱层析，显色
已经有6人回复
» 抢金币啦！回帖就可以得到:
-
祝大家学业有成，工作顺利，生意兴隆
+1/939
-
西安电子科技大学保研挑战高速IP设计NVMe，RDMA及NVMe-oF
+1/284
-
复旦大学化学系董安钢-李同涛团队招聘博士后（3-5名）
+3/159
-
新西兰奥克兰大学计算机CS招PhD及访问学者
+1/81
-
中科院深圳先进技术研究院集成电路先进封装博士后招聘
+1/80
-
坐标广州
+2/68
-
【急招】“双一流”高校-新能源材料课题组招收2026年秋季入学博士生1名(湘潭大学)
+1/41
-
【急招】“双一流”高校-新能源材料课题组招收2026年秋季入学博士生1名(湘潭大学)
+1/41
-
双一流大学湘潭大学“化工过程模拟与强化”国家地方联合工程研究中心招收博士生
+1/34
-
西安交通大学陕西省科技创新团队招聘2027年免试保送生和考研生，2-4个名额
+1/10
-
盤後看下來，資金沒退，也算是吃上了。
+1/10
-
上海交通大学研究生招生咨询会，来了！
+1/10
-
紧急招收2026年秋季入学博士生1名（湘潭大学 固体废弃物低碳利用湖南省工程研究中心）
+1/10
-
湖南师范大学国家杰青团队急招第二批博士研究生
+1/10
-
北理工国家杰青团队招博士后
+1/9
-
能源电催化领域博士后招聘（高薪40万+）
+1/7
-
北理工国家杰青团队招博士后
+1/7
-
湘潭大学“过程强化与绿色化工”创新团队补招2026年秋入学博士生（报名5月26-29日）
+2/2
-
易度质量流量计在微孔加工流通性测试中的应用
+1/2
-
【有偿访谈招募】高才通来港后，你过得还好吗？
+1/1
2楼2010-12-15 20:39:49
3楼2010-12-17 13:07:40
houhoujiayou(金币+10):呵呵，热心人啊，谢谢你啊 2011-01-04 14:12:51
|
实验一 氨基酸的分离鉴定——纸层析法 【实验目的】 1.学习氨基酸纸层析法的基本原理 2.掌握氨基酸纸层析的操作技术 【实验原理】 纸层析法（paper chromatography）是生物化学上分离、鉴定氨基酸混合物的常用技术，可用于蛋白质的氨基酸成分的定性鉴定和定量测定；也是定性或定量测定多肽、核酸碱基、糖、有机酸、维生素、抗菌素等物质的一种分离分析工具。纸层析法是用滤纸作为惰性支持物的分配层析法，其中滤纸纤维素上吸附的水是固定相，展层用的有机溶溶剂是流动相。在层析时，将样品点在距滤纸一端约2～3cm的某一处，该点称为原点；然后在密闭容器中层析溶剂沿滤纸的一个方向进行展层，这样混合氨基酸在两相中不断分配，由于分配系数（Kd）不同，结果它们分布在滤纸的不同位置上。物质被分离后在纸层析图谱上的位置可用比移值（rate of flow, Rf）来表示。所谓Rf，是指在纸层析中，从原点至氨基酸停留点（又称为层析点）中心的距离（X）与原点至溶剂前沿的距离（Y）的比值： 在一定条件下某种物质的Rf值是常数。Rf值的大小与物质的结构、性质、溶剂系统、温度、湿度、层析滤纸的型号和质量等因素有关。 【器材与试剂】 （一）器材 1.层析缸 2.点样毛细管 3.小烧杯 4.培养皿 5.量筒 6.喷雾器 7.吹风机（或烘箱） 8.层析滤纸（新华一号） 9.直尺及铅笔 (二) 试剂 1. 扩展剂(水饱和的正丁醇和乙酸混合液) 将正丁醇和乙酸以体积比4∶1在分液漏斗中进行混合，所得混合液再按体积比5∶3与蒸馏水混合；充分振荡，静置后分层，放出下层水层，漏斗内即为扩展剂。 2. 氨基酸溶液 0.5%赖氨酸、脯氨酸、亮氨酸以及它们的混合液（各组份均为0.5%）。? 3. 显色剂 0.1%水合茚三酮正丁醇溶液。 【实验步骤】 1.准备滤纸 取层析滤纸（长22㎝、宽14㎝）一张，在纸的一端距边缘2～3㎝处用铅笔划一条直线，在此直线上每间隔3㎝作一记号，如右图所示。 2.点样 ??? 用毛细管将各氨基酸样品分别点在这4个位置上，干后重复点样2～3次。每点在纸上扩散的直径最大不超过3mm。 3.扩展 用线将滤纸缝成筒状，纸的两边不能接触。将盛有约20ml扩展剂的培养皿迅速置于密闭的层析缸中，并将滤纸直立于培养皿中（点样的一端在下，扩展剂的液面需低于点样线1㎝）。待溶剂上升15～20㎝时即取出滤纸，用铅笔描出溶剂前沿界线，自然干燥或用吹风机热风吹干。 4.显色 用喷雾器均匀喷上0.1%茚三酮正丁醇溶液，然后用吹风机吹干或者置烘箱中（100℃）烘烤5min即可显出各层析斑点。 计算 计算各种氨基酸的Rf值。 【要点提示】 1.取滤纸前，要将手洗净，这是因为手上的汗渍会污染滤纸，并尽可能少接触滤纸；如条件许可，也可戴上一次性手套拿滤纸。要将滤纸平放在洁净的纸上，不可放在实验台上，以防止污染。 2.点样点的直径不能大于0.5㎝，否则分离效果不好，并且样品用量大会造成“拖尾巴”现象。 3.在滤纸的一端用点样器点上样品，点样点要高于培养皿中扩展剂液面约1cm。由于各氨基酸在流动相（有机溶剂）和固定相（滤纸吸附的水）的分配系数不同，当扩展剂从滤纸一端向另一端展开时，对样品中各组分进行了连续的抽提，从而使混合物中的各组分分离。 【思考题】 1.纸层析法的原理是什么？ 2.何谓Rf值？影响Rf值的主要因素是什么？ 【参考文献】 1. 王秀奇等．基础生物化学实验(第二版)．高等教育出版社．1999 2. Blocd R.J.A., Manual of paper chromatograhy and paper electrophoresis. 1956 |
4楼2010-12-17 13:14:52
5楼2012-08-12 22:43:56