| 查看: 787 | 回复: 0 | |||
[交流]
【求助/交流】PCR遇到的问题
|
各位同仁，大家好！最近我一直在PCR，可是一直没有很亮的目的条带出现或者目的条带很模糊，非特异性扩增很严重！我想用目的条带做下一步PCR的模板，导师给我设置的两个引物，其中一条28个碱基，另一条58个碱基，后者还有两个突变碱基，分裂为三片段，长度为23，13，20。模板是质粒，已经跑胶验证，质粒质量不错。Pfu, rTaq, ExTaq这三种酶都已经试过，pfu能扩增出目的条带，但是条带模糊，非特异性严重，rTaq能扩增出目的条带，但较模糊，引物二聚体严重，特异性扩增较好。Extaq 没有目的条带，只有引物二聚体。其他的加样基本上都是按照使用说明书加的，也征求过师兄师姐的建议。可是结果还是那个样，跟导师讨论，他让我自己探索条件。退火温度我也已经升到62度了，我也尝试过菌落PCR，可还是老样子。下一步的打算就是设个退火温度梯度，但愿会出来理想结果……不知各位同仁有什么建议没？不胜感激……我是新手，请大家伙不吝赐教…… |
回复此楼» 猜你喜欢
科研人必读：新一代 KRAS G12C 抑制剂 Olomorasib 的研究进展
已经有0人回复
-
BT-11（Omilancor）研究化合物全解析：从分子结构到实验应用要点
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有146人回复
-
富马酸贝达喹啉：二芳基喹啉类工具化合物的化学特征
已经有0人回复
-
BT投稿with editor状态快两周了，正常吗
已经有25人回复
-
Silevertinib（BDTX-1535）结构拆解：炔基双环片段为何成为合成瓶颈
已经有0人回复
-
RO4929097 解析：双苯并氮杂䓬骨架与 Notch 通路实验设计要点
已经有0人回复
-
分子量 1157 的 PROTAC 怎么配不析出：SGK3-PROTAC1 的溶解、分装与图谱复核
已经有0人回复
-
logP 6.1 的羧酸怎么配母液：GSK 650394 的溶解窗口与稀释顺序
已经有0人回复
-
从"水不溶"到 71 mg/mL：雷特格韦的 pH 依赖溶解与螯合色谱边界
已经有0人回复
-
133 Ų 的极性表面积，如何决定 TNG462 的母液配制与色谱条件
已经有0人回复
