| 查看: 543 | 回复: 0 | |||
[交流]
【求助/交流】PCR遇到的问题
|
各位同仁，大家好！最近我一直在PCR，可是一直没有很亮的目的条带出现或者目的条带很模糊，非特异性扩增很严重！我想用目的条带做下一步PCR的模板，导师给我设置的两个引物，其中一条28个碱基，另一条58个碱基，后者还有两个突变碱基，分裂为三片段，长度为23，13，20。模板是质粒，已经跑胶验证，质粒质量不错。Pfu, rTaq, ExTaq这三种酶都已经试过，pfu能扩增出目的条带，但是条带模糊，非特异性严重，rTaq能扩增出目的条带，但较模糊，引物二聚体严重，特异性扩增较好。Extaq 没有目的条带，只有引物二聚体。其他的加样基本上都是按照使用说明书加的，也征求过师兄师姐的建议。可是结果还是那个样，跟导师讨论，他让我自己探索条件。退火温度我也已经升到62度了，我也尝试过菌落PCR，可还是老样子。下一步的打算就是设个退火温度梯度，但愿会出来理想结果……不知各位同仁有什么建议没？不胜感激……我是新手，请大家伙不吝赐教…… |
回复此楼» 猜你喜欢
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有268人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
-
林科院林化所招收材料与化工专业硕士，坐标南京
已经有0人回复
