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yanfeier

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[交流] 【求助/交流】大质粒的提取已有2人参与

请问各位大侠：在比较大的质粒（23Kb以上）提取过程中应该注意的问题是什么？以及在摇菌的时候为了防止质粒的丢失应该注意什么？希望大家给出宝贵的意见，谢谢!

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1楼 2010-12-08 20:21:56

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ben1147

木虫 (正式写手)

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小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
rainwander(金币+2):鼓励积极参与交流~~~ 2010-12-08 22:09:46

注意操作，这个大小已经和断裂的基因组片段差不多大了，防止提取的产物里混的有基因组片段。

如果用试剂盒提，一般的柱子对大片段吸附洗脱效果不好

防止质粒丢失当然还是要保持一定的选择压了，就是抗生素要加好。另外刚开始的时候就要选合适的宿主菌。通常用的菌（TOP10，DH5a，JM109等等等等）对于小质粒没什么区别，但对于大质粒，或者高拷贝的质粒在菌中的稳定性是不同的。