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惟我独尊

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】大家帮我看看我的琼脂糖图怎么这样啊 已有15人参与

DGGE割胶后提DNA,然后PCR ,跑琼脂糖就成这样了,大家帮忙分析一下是什么原因啊

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YaYa785

银虫 (小有名气)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
rainwander(金币+1):鼓励积极参与解答~ 2010-12-07 14:21:28
引用回帖:
Originally posted by 惟我独尊 at 2010-12-03 20:20:52:

我的模板长度为200BP 引物为细菌V3区引物 341F和534R 程序如下: 94预变性 4 min ;94 变性1 min 55 退火 1 min  72延伸 1 min ,30 个循环 最后72 延伸 6分钟

你的模板是200bp?
那你的目的片段是多大啊?
退火时间和延伸时间是根据你的目的片段大小定的,预测你这两步程序的时间太长....
还有你说的模板量4微升是pcr的模板量?太多了,50的体系1微升就很多了,若你的模板很浓,更应该稀释之后再加....pcr模板浓度时有规定的,细菌酵母质粒都不一样的...分子克隆上有,你查查...
23楼2010-12-07 12:55:11
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pangpang1234

金虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
模板浓度是不是太大了,降低一些看看。
2楼2010-12-02 17:00:49
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惟我独尊

金虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by pangpang1234 at 2010-12-02 17:00:49:
模板浓度是不是太大了,降低一些看看。

好的 我再试试,也就是说甬道上亮亮的一片全是DNA?
3楼2010-12-02 17:17:08
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惟我独尊

金虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by tyy0321 at 2010-12-02 17:21:28:
是不是降解了

那降解的原因和什么有关呢 看Marker 的情况肯定和胶和电泳条件没关系吧,是PCR程序的问题?
5楼2010-12-02 17:24:17
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