| 查看: 565 | 回复: 0 | |||
[交流]
【求助/交流】TCA法提取蛋白最后溶解离心出现大量粘稠透明的胶状物质，是什么原因啊？
|
|
近一次用TCA/丙酮法 提取植物叶片总蛋白,在最后丙酮洗涤沉淀凉干、裂解液再溶解后离心取上清时，在上清和沉淀物之间出现大量粘稠透明的胶状物质，以前重来没有过这种情况。求助蛋白高手指点这是什么原因造成的？如何 避免再出现类似情况？这些粘稠透明的胶状物质难道是难溶的蛋白？是由于这次操作沉淀凉干时间过长，造成蛋白不可逆变性聚集难溶？ 下面是我这次提取具体过程： TCA/丙酮法 （1） 将植物叶片样品 250 mg液氮研磨粉末重悬在1.5 ml TCA提取缓冲液中，-20℃放置过夜(以前做时是6小时)，蛋白会形成白色沉淀。 （2） 5000g，4℃离心15min。用Tip头小心吸取上清丢弃。 （3） 在沉淀中加入1.6 ml冰预冷的丙酮，5000g，4℃离心10min。用Tip头小心吸取上清丢弃。 （4） 重复步骤2-3次。 （5） 将沉淀晾干（这次感觉比以前晾干时间长），使用800 ul裂解液溶解沉淀。(由于实验做到这步已经半夜了，所以就放入-20℃过夜,第二天才做的下一步。以前做都是直接进行下一步) （6） 40000g，4℃离心30min。取出上清，测定蛋白质浓度。（这步在上清和沉淀物之间出现大量粘稠透明的胶状物质，以前重来没有过这种情况） |
回复此楼» 猜你喜欢
筑牢营养安全线：以精准检测，护健康基石
已经有0人回复
-
推荐一些20种氨基酸检测的实际应用案例
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有198人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
» 抢金币啦！回帖就可以得到:
-
求一个访问学者邀请函，非常非常感谢
+1/679
-
留学导师避雷——望传播
+1/90
-
中国石油大学（华东）电气工程专业博士研究生招生
+1/81
-
成都理工大学全国重点实验室公开诚聘绿色有机合成方向联培生及科研助理
+1/76
-
希望你在这里
+1/62
-
考核制博士自荐
+1/39
-
坐标济南，山东农科院招 有机合成 or 药物化学 联培硕士研究生
+1/37
-
中科院理化技术研究所张飞龙研究员/王树涛研究员团队招生（博士/硕士）
+1/35
-
中国地质大学（北京）王琳课题组招收2026年硕转博/申请-考核博士研究生-1月8日截止
+1/28
-
征女友 @长安
+1/21
-
SCI，计算机相关可以写
+1/20
-
福建师范大学柔性电子学院招收2026年博士（储能材料与柔性电子器件）
+2/18
-
SCI，计算机相关可以写
+1/18
-
中国科学院大学-杨晗课题组-诚聘-博士后、副研究员
+1/15
-
中科院深圳理工大学网络课题组招聘博后/RA/实习生
+1/7
-
浙江大学傅杰团队(杰青)高薪招聘博士后
+1/5
-
北京工业大学材料学院吴玉锋教授、王长龙研究员招收博士研究生
+1/4
-
代算！材料学理论计算
+1/3
-
香港科技大学显示与光电国家重点实验室招收量子点钙钛矿光电液晶显示方向博士生
+2/2
-
中国矿业大学黄赳课题组联合中国科学院南京土壤研究所朱晓芳研究员诚聘博士后
+1/1