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影响检验结果的临床因素
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近十年来，我国临床试验室已普遍开展了室内质量控制和室间质评活动，这些质控多注意到了分析中和分析后的质控问题，而分析前的质控问题，尚未引起全体医务工作者的足够重视。检验结果与病人的临床状态不符的现象时有发生，遇到此情况，临床医生总是抱怨检验人员，其实许多情况并非检验人员之过。正如美国医学会科学部Jonnes（珍妮）博士指出“由于病人和标本采集因素引起的不正确检验结果要比检验科中的变化、错误更多见”；另有文献报道：“临床检验全面质量管理，不只是局限于`测定`过程的质量，更加重要的是分析前的控制。要解决这一问题，就必须加强临床医师、护士及检验人员的密切配合，搞好临床检验的全程质量控制。以下就病人准备，标本采集、送检、处理等问题做一探讨说明。 一、 病 人 的 准 备 有很多检验项目，如果病人准备不当，分析结果则无价值，甚至于造成临床上的混乱。医生、护士和检验人员有责任将该项检验病人准备的要点，用有效的方法告知病人，嘱病人遵照执行。 （一）生理因素的影响： 1．运动：强烈的肌肉运动明显影响体内代谢，暂时的变化是血清非酯化脂肪酸迅速下降，继而上升；丙酮酸、乳酸亦接着升高，后者可高达300%（3倍）。由于呼吸急促，可使Pco2下降，而PH值升高。持续较长时间的变化，是由于肌细胞酶的释放引起血清CK、AST、LDH、ALP的升高，CK的峰值在11小时后，可达运动前的1倍，持续60小时后才恢复到原水平。运动对RBC、WBC、Hb测定明显影响，可造成假性升高。运动对检验结果的影响程度与个体平时有无体育锻炼及有无疾病有关。 为减少运动对检验结果的影响，一般主张在清晨抽血，住院病人可在起床前抽血，匆忙起床到门诊的病人应至少休息15分钟后采血。 2．精神因素：紧张、情绪激动可影响神经—内分泌功能，致使血清非酯化脂肪酸、乳酸、血糖等升高。 3．饮食：进食后对某些检验项目有明显影响，餐后对CHE、CK、GLU、TG等影响非常显著，但对TP、Aib、ALT、AST、ALP、r—GT、LDH、AMY、Ca2+、BuN、CRE、choI、TBiL、DbiL等指标无明显影响。建议最好在早晨空腹抽血，必要时在进食4—6小时后抽血，血脂检查必须空腹12小时后抽血（而且检查前三天禁食肉、蛋、奶），紧急及特殊病人可根据需要随时抽血。 4．体位及采血部位：体位或采血部位的改变可引起某些检验项目指标的显著变化。站立（或用止血带）时水分会从血管内向组织间转移，大分子物质与大颗粒物质（如细胞）不能滤过而有一定程度的浓缩，但不影响低分子量物质（如GLU）。Staland（斯特兰德）比较了不得17项生化指标在立位与卧位的差别，其中有12项立位时高于卧位，具有显著性差异（P〈0·05〉，这些项目是：K+、Ca2+、P3+、Fe2+、TP、Aib、AST、ALP、ACP、Tchol、总脂。Na、Cl、BuN、Cr、GLU差别不明显。国内研究也证实了体位变化对血脂成分的明显影响 。为此建议，统一用坐位、不使用止血带来采血，以减少对某些项目的影响。另外，中国血液病研究所杨天楹教授就耳血和指血采血对血液细胞成分的变化进行研究，认为手指（以无名指）血细胞成分与静脉血接近，而耳垂血与静脉血具有非常显著差异（P〈0·01〉，差别最大可达2—3倍。建议进行血细胞计数时一律用手指血。 5．时间：在一天之中，人的代谢总是波动的，其代谢率并非是一个水平。因此在一天中，不同时间对某些项目检测要有明显影响，如在进行RBC、WBC等计数时，上午、下午波动范围很大。因此，为了反映病人的临床状态，建议下次复查时应在上次检查的同一时间进行。 （二）药物的影响： 药物进入人体内引起的物理和化学变化是临床检验结果错误（非病理性异常值）的主要因素之一。药物本身或它的代谢产物，可以对化学测定的任何步骤产生干扰。干扰可以由于药物本身物理性质，如药物本身有颜色或能发出荧光，或由于药物的化学性质，如有强还原性、与蛋白质结合成复合物及对酶的抑制作用等。药物也可以通过它的生理作用、药理及毒理作用改变生化参数。这类影响有的是治疗上需要的，但有的是不需要的，即通常所说的副作用。 任何试验都有其固定的化学反应原理和条件。因药物的参与使反应和检测条件发生了改变，直接影响了结果的准确性。例如：先锋霉素类药物可使血Cr比色测定时的最大吸收峰由505nm变为535nm而干扰Cr的测定，且药物的量与Cr的正误差呈正相关（药量越大误差越大）。Vit—c对AST为正向干扰，对CK、LDH为负向干扰，且随Vit—c浓度的增高干扰越大。止血敏可使血清TG显著降低。安乃近对血清LDH、Pi、Cr呈正向干扰，对TC、TG、GLU、UA则呈负干扰。Gascon研究认为，病人给予安乃近2h后血液中安乃近仍然干扰测定，因此建议在应用安乃近6h后采血测定。长期口服避孕药的妇女，由于肝酶的诱导合成增加，可使转氨酶、转肽酶及TG升高。近年来，利用氧化酶催化过氧化氢，以Tinder生成反应检测体内多种代谢物质浓度的方法已有多种，如GLU、TC、TG、HDL—c等。由于某些药物有较强的还原性，易于反应中过氧化氢起作用，降低红色醌亚胺生成致使测定结果偏低。如： （1）葡萄糖+H2O+O2葡萄糖氧化酶葡萄糖酸+H2O2 （2）2H2O2+4-AAP+酚过氧化物酶红色醌+H2O 这类药物有Vit-c、Vit-B6、V-E、巯甲丙脯酸、地奥心血康、安乃近、酚酸乙胺、盐酸氯丙嗪、复方丹参、氨茶碱、左旋多巴等。 日本学者研究认为，药物投给后，在血液中的最高浓度，可由尿中浓缩100-1000倍排出体外。目前常用的尿试纸试验，一直是限于一定区域内的颜色变化来定性测定为阳性或阴性，异常着色尿对此有明显干扰。临床治疗药物所见的着色尿，常见的药物有：苯妥英钠、左旋多巴、核黄素、阿霉素、正定霉素、利福平、灭滴灵等。 青霉素对磺酸法、试纸法测定尿蛋白产生不同干扰，对于尿蛋白阴性可引起假阳性，而对于阳性者则可引起假阴性反应 不同浓度的Vit-c对尿糖、潜血、尿胆原等也有不同程度的干扰作用。 长期静脉点滴的病人留取标本时可使标本稀释，造成某些项目结果偏低。又因静点时高浓度的药物进入标本中，使许多检验结果发生巨大变化。入：K+、Na+、Cl-、Ca2+、CO2-cp、GLU等，可因静点得到高出正常值1-10倍的结果。药物还可影响某些酶的活性，如非那西酊可引起ALP、r-GT活性升高。杜冷丁类药物可引起唾液型淀粉酶活力上升，而致总淀粉酶活力升高。许多药物的副作用使肝、肾、造血功能发生改变而引起检验结果异常。这种影响一旦出现，即使停药也不会很快使检验结果恢复正常。如大量使用庆大酶素及抗肿瘤化疗药物时，常给肾脏造成损害，使尿中出现蛋白、管型等异常结果。有许多种药物，如红霉素、磺胺类、对氨基水杨酸、性激素等50多种药物可引起肝功能异常等。因此当临床医生填写检验申请单时，一定要了解病人的用药种类和时间。用量较大，时间较短对检验结果有干扰，个别药物干扰时间还会更长。当检验结果与临床症状不符时，应结合分析这种现象产生的原因及了解纠正的办法，特别应了解的是药物对哪些项目有影响。护士应避免在静点时和用药4h以内采取检验标本，必要时停药后再查，以防药物的干扰作用。 二．标 本 的 采 集 要想测得的检验结果真实地反映病人的临床状态，送检标本的正确与否是一个关键因素。如果标本不符合要求，检验仪器再先进，技术再好，测得再准确，其结果也是错误的。据统计，约有半数以上的异常结果，是由于标本不符合要求造成的。其常见的原因有： 1．标本采集不正确： （1）应当空腹抽血但是实际上病人已经进食，这时候TG、CK、chE、GLU等检验项目有明显影响。 （2）病人输液过程中，从同侧肢体抽血，甚至从输液管中取“血”，抽出来的有一半是输进的液体，严重影响检验结果。 （3）抽血量不准确，如ESR测定，按要求抗凝剂与血液比例为1：4，总量为2·0ml，但实际工作中，很多标本不合格，不是未加抗凝剂就是量不准（最多见是血量不足），使结果波动很大。 （4）尿标本留取不准确。如留取24h尿标本时，不按要求留取，甚至估计尿量，对生化指标定量及肌酐清除率影响较大。 （5）精液标本应全量收集于干燥、清洁的容器内，但经常遇到的是收集在避孕套内，致使大量精子死亡，引起误会等。 （6）血培养应在发热初期或发热高峰期采血。一般要求选择在应用抗生素治疗之前，对已用药而不能终止的病人，也应在下次用药之前采血。但实际工作中，时常遇到边输注抗生素边采血的情况，造成血培养阳性率大大减低。 （7）尿培养一般主张导尿，但多次导尿易引起逆行感染，故目前常采用中段尿。但经常遇到不按要求留取标本，致使培养出多种杂菌生长而无法报告结果。 当然，还有其它不合要求的标本，不一一列举。 2．标本溶血： 溶血是临床生化检验中最常见的一种干扰和影响因素。除了常见的红细胞破坏外，血小板、白细胞等血细胞破坏释放的某种成分亦可干扰或影响生化指标的测定。 溶血干扰的机理有三种：（1）血细胞内高浓度物质逸出，使血清（浆）分析物浓度增加。不难理解如果血细胞中某一分析物浓度大大高于血清，则溶血无疑会导致血清中该成分浓度的增高。例如：RBC内与血清某一成分的比值：精氨酸1569·2/1、LDH139·9/1、醛缩酶135/1、AST38·3/1、丙酮酸激酶205/1、K+20/1、Cr18/1、叶酸16·7/1CK15·5/1、Zn2+10·7/1、等。（2）Hb对分光光度法测定中吸光度的干扰。溶血能引起可见光谱的短波长段（300-500nm）的吸光度明显增加，而影响测定结果。（3）某些细胞成分对化学反应的干扰。如血清CK动力学法测定中因RBC来源的腺苷酸激酶（AK）参与其指示反应而使CK结果假性增高。溶血可滞血清中LDH、ACP、CK、ALT等酶随溶血加重而升高；使ALP、r-GT的活性随溶血加重而降低，但机理尚不清楚。溶血对酶以外的生化指标，除K+、BIL最受干扰外，对TP、Aib、Ca2+、Na+、Cl-、Fe2+、Pi3+、TC、TG、HDL-c、Cr、BuN、GLU、UA等无明显影响。溶血还可影响乙肝五项标志物测定，对ELISA双位点一步法易产生假阳性，对竞争抑制法易产生假阴性，但对经典的两步法影响不大。 标本溶血多是由于注射器不干燥、不清洁，抽血后未拔去针头直接注入试管内等原因造成。由于血液内某些化学物质在血清（浆）与红细胞内分布不同，有的差别很大，因此采集标本时应严防溶血。 三．标 本 送 检 有些标本采集后应立即送检，如血NH3、CO2-cp、血气分析等，取血后应该在30分钟呢测定。目前最大的问题是GLU，取血后室温放置，由于糖酵解作用，每小时可降低6-11%，CK、BIL、URO、OB均可因分解或失活而明显降低，而血清中的K+、Cl-、Pi3+、AcP、NH3、NiT等均可因细胞内外的转移代谢显著增高。有时对不同的测定方法干扰方向可能相反，如TG抽提法随放置时间结果 偏低，而酶法则增高，前者因TG分解所致，后者是由于磷酸分解产生甘油所致。 四．标 本 处 理 许多检验项目在正式分析前需进行预处理。及时而适当的标本处理是每一个检验者必须熟知和遵循的，如血GLU测定需要及时分离血清，防止细胞作用使塘发生酵解；电解质测定亦需要及时分离血清，尤其是K+，防止K+从细胞内向细胞外转移；血氨、血气分析应及时操作，即使是及时放入冰瓶中也应尽快分析。做CO2-cp时，抽血后应尽量避免与空气接触过久，防止血液中的二氧化碳向空气中逸散，以保证结果的可靠性。血性胸腹水、脑脊液等在测定蛋白质等生化项目前，必须先行离心，细菌培养需根据不同要求和目的，选择合适的培养基及时接种，防止细菌污染，提高细菌检出率（特别是厌氧菌）和准确率。 抗凝剂的选择是检验质量保证的重要环节。有资料表明，血清与血浆多个指标的测定存在差异，甚至得到与实际相反的结果。凡需全血或血浆检验的项目标本，要选择合适的抗凝剂，如草酸钾能抑制LDH、AcP、和AMY的活性，亦不能用于Ca2+、K的测定；EDTA不能用于Ca2+、Na+和含氮物质的测定；肝素除了对个别项目如K+、LDH、r-GT、AMS有影响外，对其它项目影响不大。 综上所述，临床检验全程质量控制，涉及科室广泛，人员类别众多，因此，临床医护人员、检验人员应相互配合，加强临床与检验科的联系。只有搞好这项工作，才能为临床诊断、治疗、观察提供精确可靠的实验结果。 实践证明，对各种检验项目的标本，其采集前的病人准备、采集标本的种类、方法、需要量，以及抗凝剂和防腐剂的种类、用量、送检注意事项等，各实验室根据开展项目写成“检验标本采集与送检常规”并印成表格，发致各临床科室，对提高检验结果的准确性将起到重要作用． |
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