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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 综合其他 » 【求助/交流】提DNA，无水乙醇
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amilie030312

金虫 (正式写手)
★
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如果乙醇挥发的不干净后续做有酶参与的反应会效果不好，酶切会有星号活性，PCR会影响PCR酶的活性使效率下降
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11楼2010-11-12 12:25:14
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xuewenling

金虫 (正式写手)
★
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引用回帖:
Originally posted by 杜杜 at 2010-11-12 08:26:48:

我提DNA的时候，干燥后都可以看到有白色的DNA，但跑电泳的时候啥也没有，这是为什么呢？是不是和DNA的量也有关系啊，量少了就跑不出来？

白色的应该不是DNA，如果有那么多的DNA,随便跑跑都能看得见的应该
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12楼2010-11-12 16:44:56
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lvbobo823

铁杆木虫 (正式写手)
★
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酒精作用是沉淀DNA，对DNA具有洗涤作用去除杂质，但有酒精会影响下步反应，比如酶切或者连接等，所以要干燥一下。
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hehe
13楼2010-11-12 16:59:15
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xiezhenrong

金虫 (正式写手)

北斗星
★ ★
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lstt09nk(金币+1):鼓励交流 2010-11-13 13:15:36
有DNA的话肯定电泳能跑出来，怀疑你压根DNA就没提出来，你用什么提的？试剂盒的话按说明书操作一般都能提出来，建议你再重新提一下看看什么原因。
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海阔凭鱼跃，天高任鸟飞！
14楼2010-11-13 12:57:03
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hwamg

银虫 (正式写手)
★
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引用回帖:
Originally posted by 杜杜 at 2010-11-12 08:26:48:

我提DNA的时候，干燥后都可以看到有白色的DNA，但跑电泳的时候啥也没有，这是为什么呢？是不是和DNA的量也有关系啊，量少了就跑不出来？

用无水乙醇沉淀后离心，如果提的是质粒一般是看不到的。但如果是总DNA，即使有也只能看到痕迹量的白色。如果有太多的白色沉淀物，那说明你抽提的质量不纯，可能是蛋白质或RNA，电泳后泳道里会出现拖尾，RNA在最下面。你如果跑出来什么都没有，说明是其它杂质，细胞碎片什么的也有可能

这种情况下你用加等体积5M氯化锂溶液 冰上沉淀10min,再按照抽酚后的步骤做，可以进一步去除DNA里的杂质

[ Last edited by hwamg on 2010-11-13 at 14:50 ]
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15楼2010-11-13 14:48:29
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pushizi

木虫 (小有名气)

pushizi
★
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有可能是多糖什么的物质，再除一次
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但愿快乐不停歇，悲伤不再来~
16楼2010-11-14 23:01:27
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522080954

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
类似与化学中的稀释，本来DNA溶在水里，当加无水乙醇后DNA逐渐达到饱和至析出！
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17楼2010-11-14 23:09:52
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zhangdengn

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
加无水乙醇是让DNA析出，至于干燥方面，只要不是太湿，不会有影响的！
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没有最好，只有更棒！
18楼2010-11-14 23:21:44
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