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【求助/交流】T4 DNA聚合酶怎么用？
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| 各位高手，我现在想用NEB的T4 DNA聚合酶将酶切后的粘性末端补平，应该加多少浓度的dNTP啊？大概什么样一个体系？有做过的话请指点一下啊，谢谢了，呵呵 |
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scelab(金币+1):热心虫友，欢迎多来交流~~~:tiger06::tiger28::tiger23: 2010-11-06 23:50:12
恒星年(金币+5):谢谢，dNTP加多少啊？ 2010-11-07 09:40:53
scelab(金币+1):热心虫友，欢迎多来交流~~~:tiger06::tiger28::tiger23: 2010-11-06 23:50:12
恒星年(金币+5):谢谢，dNTP加多少啊？ 2010-11-07 09:40:53
3楼2010-11-06 21:35:30
恒星年(金币+5):非常感谢 2010-11-07 16:54:31
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Application notes: Protocol for blunting ends by 3´ overhang removal and 3´ recessed end fill-in: DNA should be dissolved in any 1X restriction enzyme reaction NEBuffer or 1X T4 DNA Polymerase Reaction Buffer supplemented with 100 µM dNTPs. Add 1 unit T4 DNA Polymerase per microgram DNA and incubate 15 minutes at 12°C. Stop reaction by adding EDTA to a final concentration of 10 mM and heating to 75°C for 20 minutes. CAUTION: Elevated temperatures, excessive amounts of enzyme, failure to supplement with dNTPs or long reaction times may result in recessed ends due to the 3’→ 5’ exonuclease activity of the enzyme. |
4楼2010-11-07 10:26:35
