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分光光度计用法详解-----工作曲线的绘制及使用方法
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本人是以菜鸟，初学分析，正自学分光光度计的使用，看到用分光光度计测定分析比较简便，准确。可是我有以下问题请高手回答，因是菜鸟自学，还望不吝指教（金币上不封顶，随时追加）： 1、分析不同物质同种元素或者同种物质的不同元素，如何选择波长呢？有没有相关的规律统计（或者有没有现成的总结规律或者表格。主要是测常见合金中的元素含量）？ 2、测定完成样品吸光度后，必须再测相关标准溶液的吸光度吗？ 3、完成不同浓度 标准溶液的吸光度测定后，根据标准溶液所测组分标准不同和对应的吸光度数值如何绘制工作曲线啊？不会是手动描点法吧，有没有相关的软件啊？ 4、根据样品的吸光度数值和工作曲线如何确定样品组分元素的含量啊？ 5、工作曲线一经绘制是否可以永久使用，以后只要测同类样品不同含量的同种元素，就只需按原来的方法测新样品的吸光度就可以确定所测元素的含量了呢？ 本文来自: 小木虫论坛 https://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=2547105 |
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在网上找到了如下的根据标准曲线反查给定吸光度的浓度数值方法： 依据标准曲线查询被测物的浓度，势必影响测定结果的准确性。我们用Excel电子表格中的TREND函数，将标准品的吸光度值与对应浓度进行直线拟合，然后由被测物的吸光度值返回线性回归拟合线，查询被测物的浓度，方法简便，可消除视觉差，提高实验的准确性。 方法：打开Excel电子表格，在A1∶A6区域由低浓度依次输入标准品的浓度值；在B1∶B6区域输入经比色(或比浊)后得到的标准品相应A值：存盘以备查询结果。点击工具栏中的函数钮(fx)，选取“统计”项中的TREND函数；点击“确定”，即出现TREND函数输入框。在known-y′s框中输入“A1∶A6”，在known-x′s中输入“B1∶B6”；在new-x′s中，输入被测物的A值，其相应的浓度值立即出现在“计算结果”处。随着计算机的普及，Excel电子表格亦被广泛应用于实验室，因此，用Excel电子表格制作标准曲线及查询测定结果准确、实用。 大家觉得如何，直接在电脑里就可以计算了，不是很好吗？ 这样就不比绘制标准曲线了啊，对么？ |
5楼2010-11-01 19:49:02
tianjm07
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2楼2010-11-01 13:55:58
拥抱未来
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0539lyb(金币+10):感谢你的热心回答，受教了。关于问题5，在要求不十分严格、相关样品组分相似时，能否使用原来的工作曲线啊？ 2010-11-01 18:41:34
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分光光度计包括很多，你说的应该是可见光的，比较简单，用于测定在一定波长范围内对特定波长的光有吸收的离子。 1.因为在可见光范围内能测定的每一种离子都对应一特定的波长，严格来说一个完整的论文实验是要做条件试验来选择最佳吸收波长的（即其他条件相同时，选择具有最大吸收的波长），不过你可以查文献资料得到一些离子的最佳吸收波长。 2.配置不同浓度的标准溶液，做浓度和吸光度的标准曲线，然后再测样品的吸光度，必须得使样品落在标准曲线的线性范围内，这个也需要做探讨性试验。 3.绘制曲线，手工可以误差比较大。有绘图软件，像origin就挺好。可以自动拟合线性曲线，得到相关系数等信息。 4.直接在标准曲线上查侧得样品吸光度所对应的浓度，即为样品的浓度。 5.不可以。因为实验中影响因素很多，测定的样品不可能只含一种离子，所以每测一次样品，就得做一次同等条件下的标准曲线。 |
3楼2010-11-01 17:13:31
4楼2010-11-01 19:47:28
6楼2010-11-02 01:24:20
7楼2010-11-02 08:59:26
0539lyb(金币+10):谢谢你的回答，关于问题2-5，可以用本人5楼所找到的方法吗，是不是可以省很多步骤啊？ 2010-11-02 09:57:56
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第一个问题，可以用待测液进行全波长扫描，哪个吸光度高，对应的波长就是最佳波长。也可以找数据库。找不到的话就用全波长扫描，来确定波长。 第二个问题，先测不同浓度标液的吸光度，做浓度—吸光度标准曲线，再测出待测液的吸光度，根据曲线就可以算出待测液的浓度。 第三个问题，用Excel或者origin都行。 第四个问题。绘出图，再线性回归一下就得出一个方程，y=ax+b,根据方程就求出待测液的浓度了。 第五个问题，一般精确度要求不高的可以做一条标准曲线，用好多天。如果精确度要求很高的就要一天做一次标准曲线了。 |
8楼2010-11-02 09:40:16
9楼2010-11-02 10:05:11
10楼2010-11-02 10:13:25
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