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阿德54007

金虫 (正式写手)

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scelab(金币+5):热心虫友,欢迎多来交流~~~:tiger06::tiger28::tiger23: 2010-10-29 23:53:41
我最近经常提取植物组织的RNA,用试剂盒提取还不如我们实验室自己配置的溶液好用。干燥后用30ul水溶解,提取的浓度都在几百ng/ul。
    实验的关键是:净、快。所谓的净就是实验所用的物品全部用DEPC处理过的,研钵要在烘箱高温灭菌(我们是180°)。快,就是在研磨的时候尽量快的研磨完,减少材料暴露在空气的时间,一旦研钵的液氮挥发完毕就立刻补充。
    植物和动物材料差异比较大,我说的不一定都对,希望对你的实验能有帮助。另外不要盲目的相信试剂盒,有些材料用试剂盒提取效果反而不如自己查找文献配置的药品好用。
阳光温热,岁月静好,你还没来,我怎敢老
21楼2010-10-29 23:35:03
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gylry

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by 阿德54007 at 2010-10-29 23:35:03:
我最近经常提取植物组织的RNA,用试剂盒提取还不如我们实验室自己配置的溶液好用。干燥后用30ul水溶解,提取的浓度都在几百ng/ul。
    实验的关键是:净、快。所谓的净就是实验所用的物品全部用DEPC处理过的,研 ...

说的不错,感谢
22楼2010-10-30 13:58:31
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cyz20050505

木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
一定要控制组织的用量啊,绝不贪多,我今天上午才用Trzol抽提了RNA,冻存的组织,也包括肌肉,一次搞了8个组织,全部成功,液氮始终保护,研磨充分,再次强调组织用量要少。只要电泳检测看到完整的18S,28S,不要太弱就行,不影响后续反应,我们已经做了很多次了,建议楼主试下,胆大心细。祝实验成功。
23楼2010-10-30 14:14:17
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超然渡陈之家

新虫 (初入文坛)

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dhd997(金币+1):鼓励交流。 2010-10-31 13:57:21
你可以用actin作为内参,跟你提的RNA产物一起PCR,看一下结果就知道是样品的原因还是操作的原因了
24楼2010-10-30 15:33:01
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xinqing398

铁虫 (初入文坛)

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dhd997(金币+1):谢谢交流。 2010-10-31 13:57:29
肌肉组织的RNA含量是非常低的,所以提取浓度低也很正常。另外研磨是非常关键的,直接影响产量和质量。如果用电动匀浆器可能会提取质量和总量会好一些。
25楼2010-10-30 18:30:16
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dongyi31

铜虫 (小有名气)

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dhd997(金币+1):谢谢交流。 2010-10-31 13:57:39
没有对照没法说明问题

到底是试剂盒质量呢,还是你的操作手法呢,还是试剂盒和材料不搭配呢

换个人提,换个试剂盒
10083434
26楼2010-10-30 18:36:06
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ZOEY21

金虫 (小有名气)


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引用回帖:
Originally posted by 阿德54007 at 2010-10-29 23:35:03:
我最近经常提取植物组织的RNA,用试剂盒提取还不如我们实验室自己配置的溶液好用。干燥后用30ul水溶解,提取的浓度都在几百ng/ul。
    实验的关键是:净、快。所谓的净就是实验所用的物品全部用DEPC处理过的,研 ...

同问高手 研钵剪刀之类的要在烘箱高温灭菌180°多长时间? 灭菌前也需要DEPC处理吗? 我们的移液器是提DNA混用的,有说酒精擦就可以的,有说要专用的移液器,影响大吗?
谢谢啦!
27楼2010-10-31 10:06:25
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wangy0908

金虫 (正式写手)

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dhd997(金币+1):鼓励交流。 2010-10-31 13:58:00
你用的是什么组织。提RNA的量跟组织有关系。以及样品的用量!
28楼2010-10-31 10:46:50
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gylry

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by wangy0908 at 2010-10-31 10:46:50:
你用的是什么组织。提RNA的量跟组织有关系。以及样品的用量!

猪的背肌,有很大关系的吗?
29楼2010-10-31 13:37:40
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wq123good

金虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
刚开始我也是觉得提RNA挺困难的
提得多了就好了
几点心得:
1 组织样品尽量新鲜,及时处理
2 操作试剂盒是注意时间和温度的把握
3 所用的移液器,EP管,枪头等都要重新准备
4 操作台保证清洁
过好每一天
30楼2010-10-31 15:22:10
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