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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】试剂盒提不出RNA，求救啊
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阿德54007

金虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★ ★ ★
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scelab(金币+5):热心虫友，欢迎多来交流~~~:tiger06::tiger28::tiger23: 2010-10-29 23:53:41
我最近经常提取植物组织的RNA，用试剂盒提取还不如我们实验室自己配置的溶液好用。干燥后用30ul水溶解，提取的浓度都在几百ng/ul。
    实验的关键是：净、快。所谓的净就是实验所用的物品全部用DEPC处理过的，研钵要在烘箱高温灭菌（我们是180°）。快，就是在研磨的时候尽量快的研磨完，减少材料暴露在空气的时间，一旦研钵的液氮挥发完毕就立刻补充。
    植物和动物材料差异比较大，我说的不一定都对，希望对你的实验能有帮助。另外不要盲目的相信试剂盒，有些材料用试剂盒提取效果反而不如自己查找文献配置的药品好用。
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阳光温热，岁月静好，你还没来，我怎敢老
21楼2010-10-29 23:35:03
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gylry

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 阿德54007 at 2010-10-29 23:35:03:
我最近经常提取植物组织的RNA，用试剂盒提取还不如我们实验室自己配置的溶液好用。干燥后用30ul水溶解，提取的浓度都在几百ng/ul。
    实验的关键是：净、快。所谓的净就是实验所用的物品全部用DEPC处理过的，研 ...

说的不错，感谢
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22楼2010-10-30 13:58:31
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cyz20050505

木虫 (正式写手)
★
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一定要控制组织的用量啊，绝不贪多，我今天上午才用Trzol抽提了RNA，冻存的组织，也包括肌肉，一次搞了8个组织，全部成功，液氮始终保护，研磨充分，再次强调组织用量要少。只要电泳检测看到完整的18S，28S，不要太弱就行，不影响后续反应，我们已经做了很多次了，建议楼主试下，胆大心细。祝实验成功。
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23楼2010-10-30 14:14:17
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超然渡陈之家

新虫 (初入文坛)
★ ★
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dhd997(金币+1):鼓励交流。 2010-10-31 13:57:21
你可以用actin作为内参，跟你提的RNA产物一起PCR，看一下结果就知道是样品的原因还是操作的原因了
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24楼2010-10-30 15:33:01
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xinqing398

铁虫 (初入文坛)
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dhd997(金币+1):谢谢交流。 2010-10-31 13:57:29
肌肉组织的RNA含量是非常低的，所以提取浓度低也很正常。另外研磨是非常关键的，直接影响产量和质量。如果用电动匀浆器可能会提取质量和总量会好一些。
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25楼2010-10-30 18:30:16
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dongyi31

铜虫 (小有名气)
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dhd997(金币+1):谢谢交流。 2010-10-31 13:57:39
没有对照没法说明问题

到底是试剂盒质量呢，还是你的操作手法呢，还是试剂盒和材料不搭配呢

换个人提，换个试剂盒
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10083434
26楼2010-10-30 18:36:06
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ZOEY21

金虫 (小有名气)
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引用回帖:
Originally posted by 阿德54007 at 2010-10-29 23:35:03:
我最近经常提取植物组织的RNA，用试剂盒提取还不如我们实验室自己配置的溶液好用。干燥后用30ul水溶解，提取的浓度都在几百ng/ul。
    实验的关键是：净、快。所谓的净就是实验所用的物品全部用DEPC处理过的，研 ...

同问高手 研钵剪刀之类的要在烘箱高温灭菌180°多长时间？ 灭菌前也需要DEPC处理吗？ 我们的移液器是提DNA混用的，有说酒精擦就可以的，有说要专用的移液器，影响大吗？
谢谢啦!
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27楼2010-10-31 10:06:25
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wangy0908

金虫 (正式写手)
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dhd997(金币+1):鼓励交流。 2010-10-31 13:58:00
你用的是什么组织。提RNA的量跟组织有关系。以及样品的用量！
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28楼2010-10-31 10:46:50
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gylry

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by wangy0908 at 2010-10-31 10:46:50:
你用的是什么组织。提RNA的量跟组织有关系。以及样品的用量！

猪的背肌，有很大关系的吗？
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29楼2010-10-31 13:37:40
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wq123good

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
刚开始我也是觉得提RNA挺困难的
提得多了就好了
几点心得：
1 组织样品尽量新鲜，及时处理
2 操作试剂盒是注意时间和温度的把握
3 所用的移液器，EP管，枪头等都要重新准备
4 操作台保证清洁
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过好每一天
30楼2010-10-31 15:22:10
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